| 致谢 | 第6-11页 |
| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-42页 |
| 1.1 微生物油脂 | 第19-25页 |
| 1.1.1 产油微生物 | 第19-23页 |
| 1.1.2 微生物油脂的用途 | 第23-25页 |
| 1.2 微生物油脂的研究现状 | 第25-36页 |
| 1.2.1 微生物油脂合成代谢及调控 | 第25-29页 |
| 1.2.2 微生物油脂生产中的基因工程改造 | 第29-30页 |
| 1.2.3 微生物油脂发酵优化策略 | 第30-33页 |
| 1.2.4 微生物油脂生产原料 | 第33-36页 |
| 1.3 农业废弃秸秆在微生物油脂生产中的应用 | 第36-39页 |
| 1.3.1 农业废弃秸秆的利用现状 | 第36-37页 |
| 1.3.2 农业废弃秸秆在微生物油脂生产中的应用 | 第37-39页 |
| 1.4 选题背景和研究内容 | 第39-42页 |
| 第二章 秸秆-微生物油脂转化的多菌种分步发酵体系的构建及特性研究 | 第42-59页 |
| 2.1 材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 菌种 | 第42页 |
| 2.1.2 培养基 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第44页 |
| 2.2 方法 | 第44-48页 |
| 2.2.1 碱预处理小麦的制备 | 第44页 |
| 2.2.2 浅层固态发酵 | 第44-45页 |
| 2.2.3 酵母液态深层发酵产油 | 第45页 |
| 2.2.4 粗酶液制备 | 第45页 |
| 2.2.5 水解实验 | 第45页 |
| 2.2.6 小麦秸秆酸水解液制备 | 第45页 |
| 2.2.7 蛋白浓度测定 | 第45页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第45-46页 |
| 2.2.9 酶活测定 | 第46-47页 |
| 2.2.10 DNS法测定还原糖浓度 | 第47页 |
| 2.2.11 RP-HPLC分析糖组分 | 第47页 |
| 2.2.12 生物量和油脂测定 | 第47-48页 |
| 2.2.13 试验设计与统计分析方法 | 第48页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第48-58页 |
| 2.3.1 正交设计构建高效糖化酶生产混菌体系 | 第48-51页 |
| 2.3.2 菌种因素对Consortium 20酶系糖化性质的影响 | 第51-53页 |
| 2.3.3 菌种比例调整优化Consortium-APcT1 | 第53-54页 |
| 2.3.4 混菌组合Consortium-APcT2的性质研究 | 第54-57页 |
| 2.3.5 混菌发酵水解液的微生物油脂生产 | 第57-58页 |
| 2.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 纤维素-微生物油脂转化(CBP)的单菌株一步发酵菌种的筛选 | 第59-68页 |
| 3.1 材料 | 第59-60页 |
| 3.1.1 菌种来源 | 第59页 |
| 3.1.2 培养基配方 | 第59-60页 |
| 3.1.3 试剂和缓冲液 | 第60页 |
| 3.2 方法 | 第60-62页 |
| 3.2.1 苏丹Ⅲ染色 | 第60页 |
| 3.2.2 刚果红染色 | 第60页 |
| 3.2.3 纤维素降解菌初筛 | 第60-61页 |
| 3.2.4 内生真菌的分离方法 | 第61页 |
| 3.2.5 菌株的18S rDNA和ITS rDNA扩增鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2.6 指标测定 | 第62页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第62-67页 |
| 3.3.1 纤维素降解真菌中筛选纤维素-微生物油脂一步法转化菌种 | 第62-64页 |
| 3.3.2 植物内生真菌中筛选纤维素-微生物油脂一步法转化菌种 | 第64-66页 |
| 3.3.3 纤维素-微生物油脂一步法转化菌种的鉴定 | 第66-67页 |
| 3.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 Penicillium P-2纤维素油脂转化及液态CBP发酵行为研究 | 第68-78页 |
| 4.1 材料 | 第68页 |
| 4.1.1 菌种 | 第68页 |
| 4.1.2 培养基配方 | 第68页 |
| 4.1.3 试剂 | 第68页 |
| 4.2 方法 | 第68-70页 |
| 4.2.1 秸杆和麸皮预处理 | 第68-69页 |
| 4.2.2 孢子悬液的制备 | 第69页 |
| 4.2.3 菌丝接种物制备 | 第69页 |
| 4.2.4 液体深层发酵(SmF) | 第69页 |
| 4.2.5 固态浅层发酵(SSF) | 第69页 |
| 4.2.6 固态发酵基质的粗酶提取 | 第69页 |
| 4.2.7 酶活测定 | 第69页 |
| 4.2.8 脂肪酸组分分析 | 第69-70页 |
| 4.2.9 统计学方法 | 第70页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第70-77页 |
| 4.3.1 菌株P-2液态发酵条件下的CBP发酵行为研究 | 第70-71页 |
| 4.3.2 纤维素酶添加对菌株P-2液态CBP发酵中油脂积累行为的影响 | 第71-74页 |
| 4.3.3 菌株P-2固态发酵秸秆麸皮混合物的微生物油脂生产能力研究 | 第74-76页 |
| 4.3.4 Penicillium sp.P-2纤维素油脂转化能力评估 | 第76-77页 |
| 4.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 米曲霉A-4固态发酵秸秆麸皮混合物的微生物油脂生产及发酵优化 | 第78-91页 |
| 5.1 材料 | 第78页 |
| 5.1.1 菌种 | 第78页 |
| 5.1.2 培养基 | 第78页 |
| 5.2 方法 | 第78-80页 |
| 5.2.1 固态基质预处理 | 第78页 |
| 5.2.2 菌丝接种物的制备 | 第78页 |
| 5.2.3 菌株的形态鉴定 | 第78-79页 |
| 5.2.4 尼罗红染色 | 第79页 |
| 5.2.5 发酵条件 | 第79页 |
| 5.2.6 固态发酵体系中的生物量测定 | 第79-80页 |
| 5.2.7 粗酶提取及酶活测定 | 第80页 |
| 5.2.8 统计软件 | 第80页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第80-89页 |
| 5.3.1 A.orzae A-4的形态学观察 | 第80-81页 |
| 5.3.2 A.oryzae A-4在固体秸杆麸皮混合物中的CBP固态发酵研究 | 第81-83页 |
| 5.3.3 纤维素酶在A.oryzae A-4 CBP固态发酵过程中的作用初探 | 第83-85页 |
| 5.3.4 A.oryzae A-4微生物油脂生产的固态发酵条件优化 | 第85-88页 |
| 5.3.5 A.oryzae A-4的纤维素油脂转化评价 | 第88-89页 |
| 5.4 本章小结 | 第89-91页 |
| 第六章 纤维素酶基因在米曲霉A-4中的插入表达及高效产油重组菌的筛选 | 第91-131页 |
| 6.1 材料 | 第92-96页 |
| 6.1.1 菌种、基因和质粒 | 第92-93页 |
| 6.1.2 引物 | 第93页 |
| 6.1.3 培养基 | 第93-94页 |
| 6.1.4 主要试剂 | 第94-96页 |
| 6.2 方法 | 第96-108页 |
| 6.2.1 丝状真菌基因组提取 | 第96页 |
| 6.2.2 重叠PCR扩增目的基因 | 第96-99页 |
| 6.2.3 重组载体的构建、转化与验证 | 第99-101页 |
| 6.2.4 米曲霉A-4原生质体制备及转化 | 第101-102页 |
| 6.2.5 基因组PCR验证重组转化子 | 第102-103页 |
| 6.2.6 菌丝的培养及荧光显微镜观察 | 第103页 |
| 6.2.7 DIG标记的Southern杂交实验 | 第103-108页 |
| 6.2.8 发酵实验 | 第108页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第108-129页 |
| 6.3.1 产油米曲霉A-4的遗传转化系统研究 | 第108-113页 |
| 6.3.2 产油米曲霉A-4的纤维素酶表达载体构建 | 第113-115页 |
| 6.3.3 阳性转化子的纤维素酶分泌性能分析 | 第115-117页 |
| 6.3.4 纤维素酶分泌增强的转化子的油脂积累能力分析 | 第117-118页 |
| 6.3.5 转化子与野生菌在不同底物中的液态发酵性能对比 | 第118-123页 |
| 6.3.6 转化子与野生菌在秸秆麸皮混合物中的固态发酵性能对比 | 第123-126页 |
| 6.3.7 转化子中纤维素酶基因插入信息初探 | 第126-129页 |
| 6.4 本章小结 | 第129-131页 |
| 论文结论与展望 | 第131-135页 |
| 1、论文的主要结论 | 第131-133页 |
| 2、论文的创新点 | 第133页 |
| 3、论文的展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-153页 |
| 作者简历 | 第153-155页 |
