| 目录 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 口腔癌组织中SKA1的表达及其临床意义 | 第18-25页 |
| 1. 前言 | 第18-19页 |
| 2. 材料与方法 | 第19-22页 |
| 2.1 患者来源及临床资料 | 第19页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.4 试剂配置 | 第20页 |
| 2.5 实验方法 | 第20-21页 |
| 2.5.1 标本处理 | 第20页 |
| 2.5.2 免疫组化染色 | 第20-21页 |
| 2.5.3 免疫组化结果判断 | 第21页 |
| 2.6 统计学方法 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-24页 |
| 4 讨论 | 第24-25页 |
| 第二部分 携带SKA1基因短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默的研究 | 第25-48页 |
| 1. 前言 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 质粒、菌株和包装细胞、 | 第26-28页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 主要仪器和耗材 | 第29-30页 |
| 2.4 溶液配制 | 第30页 |
| 2.5 方法 | 第30-42页 |
| 2.5.1 SKA1-LOF质粒载体的构建 | 第30-33页 |
| 2.5.2 SKA1-GOF慢病毒载体的构建及鉴定 | 第33-36页 |
| 2.5.3 细胞转染 | 第36-38页 |
| 2.5.4 Western blot筛选可有效干扰目的基因表达的慢病毒质粒 | 第38-41页 |
| 2.5.5 慢病毒的包装 | 第41页 |
| 2.5.6 滴度测定 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-46页 |
| 3.1 SKA1 shRNA慢病毒载体鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.1 pFH-L载体的双酶切 | 第42页 |
| 3.1.2 PCR法鉴定SKA1-LOF慢病毒载体 | 第42-43页 |
| 3.1.3 SKA1-LOF慢病毒载体的测序鉴定 | 第43页 |
| 3.2 SKA1-GOF载体的测序鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.1 PCR产物的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.2 阳性克隆的PCR鉴定 | 第44页 |
| 3.3 Western blot验证靶点 | 第44-46页 |
| 3.4 shRNA-SKA1的包装及滴度测定 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三部分 慢病毒介导RNA干扰口腔鳞癌细胞SKA1基因对细胞恶性增殖和周期进展的影响 | 第48-61页 |
| 1. 前言 | 第48-49页 |
| 2. 材料与方法 | 第49-53页 |
| 2.1 细胞株 | 第49页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第49页 |
| 2.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 2.4 试剂配置 | 第50-51页 |
| 2.5 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.5.1 慢病毒感染 | 第51页 |
| 2.5.2 Western blot | 第51-52页 |
| 2.5.3 MTT法测量生长曲线 | 第52页 |
| 2.5.4 克隆形成实验 | 第52页 |
| 2.5.5 流式细胞仪(FACS)检测细胞周期 | 第52-53页 |
| 2.6 统计学方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-59页 |
| 3.1 慢病毒感染效率鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2 SKA1基因的沉默效率验证 | 第54-55页 |
| 3.4 SKA1沉默对口腔鳞癌细胞增殖的影响 | 第55页 |
| 3.5 SKA1沉默对口腔鳞癌细胞体外克隆形成能力的影响 | 第55-57页 |
| 3.6 流式细胞仪检测细胞周期 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四部分 表达谱芯片研究SKA1调节口腔鳞癌细胞的恶性增殖的分子机制 | 第61-75页 |
| 1. 前言 | 第61-62页 |
| 2. 材料与方法 | 第62-70页 |
| 2.1 细胞株 | 第62页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第62-63页 |
| 2.3 主要仪器 | 第63页 |
| 2.4 试剂配置 | 第63-64页 |
| 2.5 实验方法 | 第64-70页 |
| 2.5.1 慢病毒感染 | 第64页 |
| 2.5.2 总RNA的抽提 | 第64-65页 |
| 2.5.3 cDNA探针制备 | 第65-66页 |
| 2.5.4 芯片杂交 | 第66-68页 |
| 2.5.5 qPCR验证差异表达基因 | 第68-70页 |
| 3 结果 | 第70-73页 |
| 3.1 基因芯片结果 | 第70-72页 |
| 3.1.1 RNA样品质控信息 | 第70页 |
| 3.1.2 基因功能聚类(Gene Ontology,GO)分析 | 第70-72页 |
| 3.2 qPCR验证结果 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 综述 | 第83-92页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第93-113页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第113页 |
