| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌及其活性物质 | 第11-13页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第11页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌的活性物质 | 第11-13页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白 | 第13-18页 |
| 1.2.1 杀虫晶体蛋白的分类及多样性 | 第14-16页 |
| 1.2.2 辅助蛋白与Cry蛋白形成的关系 | 第16-17页 |
| 1.2.3 杀虫晶体蛋白基因的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.3 苏云金芽胞杆菌的营养期杀虫蛋白 | 第18-20页 |
| 1.3.1 营养期杀虫蛋白的分类 | 第19页 |
| 1.3.2 营养期杀虫蛋白的杀虫活性和作用机理 | 第19-20页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌的应用现状 | 第20-21页 |
| 1.5 苏云金芽胞杆菌新基因的发掘策略 | 第21-23页 |
| 1.5.1 传统的新基因发掘策略 | 第22页 |
| 1.5.2 基于第二代高通量测序和BtToxin_scanner系统建立的发掘策略 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-33页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第24-29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.3 试剂 | 第30-32页 |
| 2.1.4 仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-39页 |
| 2.2.1 DNA常规操作 | 第33-37页 |
| 2.2.2 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体显微镜观察 | 第37页 |
| 2.2.3 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的制备 | 第37页 |
| 2.2.4 晶体蛋白浓度测定方法 | 第37页 |
| 2.2.5 蛋白的SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.6 以棉铃虫作为供试昆虫的毒力测定 | 第38页 |
| 2.2.7 以孑孓作为供试昆虫的毒力测定 | 第38页 |
| 2.2.8 以秀丽小杆线虫供试害虫的毒力测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-60页 |
| 3.1 新型杀虫蛋白基因的克隆 | 第39-43页 |
| 3.1.1 确定要克隆的候选基因 | 第40-41页 |
| 3.1.2 确定基因菌株来源信息 | 第41-42页 |
| 3.1.3 克隆新型杀虫蛋白基因 | 第42-43页 |
| 3.2 新型杀虫蛋白基因的生物信息学分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 杀虫晶体蛋白的生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 营养期杀虫蛋白的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.3 新型杀虫晶体蛋白基因的表达和活性研究 | 第47-54页 |
| 3.3.1 cry29Ba1和cry21Ea1在苏云金芽胞杆菌中表达 | 第47-48页 |
| 3.3.2 cry73Aa1在苏云金芽胞杆菌中表达 | 第48-51页 |
| 3.3.3 杀虫晶体蛋白Cry29Ba1、Cry21Ea1和Cry73Aa1的活性研究 | 第51-54页 |
| 3.4 实验室已克隆的8个cry基因的表达和活性研究 | 第54-60页 |
| 3.4.1 已克隆的8个cry基因的表达检测 | 第54-56页 |
| 3.4.2 部分杀虫晶体蛋白的毒性测定 | 第56-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
