| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 大肠杆菌重组表达系统 | 第13-16页 |
| 1.1.1 大肠杆菌表达系统的构成 | 第13页 |
| 1.1.2 影响外源基因在大肠杆菌系统中表达的因素 | 第13-15页 |
| 1.1.3 pET表达系统 | 第15-16页 |
| 1.2 肌醇氧化酶 | 第16-23页 |
| 1.2.1 简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 肌醇氧化酶的研究背景 | 第17-18页 |
| 1.2.3 肌醇氧化酶的结构与活性中心 | 第18-21页 |
| 1.2.4 肌醇氧化酶的催化机制及反应机理 | 第21-22页 |
| 1.2.5 肌醇氧化酶的应用 | 第22-23页 |
| 1.3 葡萄糖醛酸 | 第23-25页 |
| 1.3.1 葡萄糖醛酸的性质与应用 | 第23-24页 |
| 1.3.2 葡萄糖醛酸的制备方法 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题的基本思路和拟研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-34页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.2 工具酶及主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.4 分子生物学相关操作 | 第30-32页 |
| 2.4.1 分子克隆相关实验 | 第30-31页 |
| 2.4.2 大肠杆菌菌体浓度测定 | 第31页 |
| 2.4.3 大肠杆菌细胞超声破碎 | 第31-32页 |
| 2.4.4 蛋白浓度测定 | 第32页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE电泳 | 第32页 |
| 2.5 肌醇氧化酶酶活的测定 | 第32-33页 |
| 2.6 葡萄糖醛酸含量的测定 | 第33-34页 |
| 第三章 肌醇氧化酶在大肠杆菌中的重组表达与优化 | 第34-44页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.2.2 工具酶与主要试剂 | 第34-35页 |
| 3.2.3 培养基与培养条件 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.3.1 肌醇氧化酶编码基因的获得 | 第35-36页 |
| 3.3.2 pET28a(+)-MIOX表达载体构建 | 第36页 |
| 3.3.3 肌醇氧化酶重组表达 | 第36-37页 |
| 3.3.4 肌醇氧化酶表达条件的优化 | 第37页 |
| 3.3.5 表达产物可溶性的分析 | 第37-38页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第38-43页 |
| 3.4.1 表达载体和重组菌株的构建 | 第38-39页 |
| 3.4.2 重组蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 3.4.3 诱导条件对肌醇氧化酶表达的影响 | 第40-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 肌醇氧化酶的纯化与性质测定 | 第44-52页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第44-45页 |
| 4.2.2 主要试剂与分离设备 | 第45页 |
| 4.2.3 培养基与培养条件 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 样品处理 | 第45页 |
| 4.3.2 蛋白纯化 | 第45-46页 |
| 4.3.3 除盐 | 第46-47页 |
| 4.3.4 蛋白浓度与酶活测定 | 第47页 |
| 4.3.5 肌醇氧化酶的酶学性质分析 | 第47页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第47-50页 |
| 4.4.1 蛋白纯化 | 第47-49页 |
| 4.4.2 酶学性质分析 | 第49-50页 |
| 4.5 小结 | 第50-52页 |
| 第五章 生物催化肌醇生产葡萄糖醛酸 | 第52-62页 |
| 5.1 引言 | 第52页 |
| 5.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第52页 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 | 第52页 |
| 5.2.3 培养基与培养条件 | 第52-53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 5.3.1 催化剂形式的选择 | 第53页 |
| 5.3.2 转化条件的优化 | 第53-54页 |
| 5.3.3 间歇性添加催化剂对转化的影响 | 第54页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第54-61页 |
| 5.4.1 不同催化剂形式对转化的影响 | 第54-55页 |
| 5.4.2 缓冲液pH值对转化的影响 | 第55-56页 |
| 5.4.3 反应时间对转化的影响 | 第56-57页 |
| 5.4.4 菌体浓度对转化的影响 | 第57-58页 |
| 5.4.5 底物浓度对转化的影响 | 第58-59页 |
| 5.4.6 溶氧量对转化的影响 | 第59-60页 |
| 5.4.7 间歇性添加催化剂对转化的影响 | 第60-61页 |
| 5.5 小结 | 第61-62页 |
| 第六章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 6.1 结论 | 第62-63页 |
| 6.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |