| 英文缩略词 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一部分 基于重组MS2病毒样颗粒扎伊尔型埃博拉病毒质控品的研制及相关核酸检测室间质量评价的研究 | 第15-53页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 1. 材料和方法 | 第16-37页 |
| 1.1. 实验材料和试剂配制 | 第16-22页 |
| 1.1.1. 仪器 | 第16-17页 |
| 1.1.2. 菌株和质粒 | 第17-18页 |
| 1.1.3. 主要实验耗材 | 第18-19页 |
| 1.1.4. 主要实验试剂 | 第19-20页 |
| 1.1.5. 培养基和溶液的配制 | 第20-22页 |
| 1.2. 方法 | 第22-37页 |
| 1.2.1. 内含NP、GP/L基因序列的重组病毒样颗粒原核表达载体的构建 | 第22-29页 |
| 1.2.2. 重组病毒样颗粒的表达和纯化 | 第29-32页 |
| 1.2.3. 重组病毒样颗粒的鉴定 | 第32-35页 |
| 1.2.4. 包裹EBOV RNA片段的重组病毒样颗粒作为质控样本开展全国室间质量评价 | 第35-37页 |
| 1.2.5. 统计学分析 | 第37页 |
| 2. 结果 | 第37-47页 |
| 2.1. 内含NP、GP/L RNA的重组病毒样颗粒原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.1.1. PCR扩增NP、GP/L目的片段 | 第37-38页 |
| 2.1.2. pACYC-MS2-NP、pACYC-MS2-GP/L载体的验证 | 第38-39页 |
| 2.2. 重组病毒样颗粒的表达和纯化 | 第39-40页 |
| 2.3. 重组病毒样颗粒的鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.1. 琼脂糖凝胶电泳鉴定重组病毒样颗粒 | 第40页 |
| 2.3.2. SDS-PAGE鉴定重组病毒样颗粒 | 第40-41页 |
| 2.3.3. RT-PCR鉴定重组病毒样颗粒内含目的RNA序列 | 第41页 |
| 2.3.4. 商业化试剂盒验证VLPs包装片段 | 第41-43页 |
| 2.4. 以重组病毒样颗粒作为样本的室间质量评价 | 第43-47页 |
| 2.4.1. 样本盘的建立 | 第43页 |
| 2.4.2 样本盘的稳定性实验 | 第43-44页 |
| 2.4.3. 室间质量评价结果 | 第44-47页 |
| 3. 讨论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第二部分 表面展示细胞穿透肽TAT的重组MS2病毒样颗粒miR-122递送载体的制备及其肝癌治疗效果的研究 | 第53-121页 |
| 前言 | 第53-56页 |
| 1. 材料和方法 | 第56-84页 |
| 1.1. 实验材料和试剂配制 | 第56-65页 |
| 1.1.1. 仪器 | 第56-57页 |
| 1.1.2. 菌株、细胞系和质粒 | 第57-58页 |
| 1.1.3. 主要实验耗材 | 第58-59页 |
| 1.1.4. 主要实验试剂 | 第59-61页 |
| 1.1.5.溶液的配制 | 第61-65页 |
| 1.2. 方法 | 第65-84页 |
| 1.2.1. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒miR-122递送载体的构建 | 第65-68页 |
| 1.2.2.重组病毒样颗粒的表达和纯化 | 第68-70页 |
| 1.2.3. 重组病毒样颗粒的鉴定 | 第70页 |
| 1.2.4. 内含pre-miR122表面展示TAT的重组病毒样颗粒的FITC荧光素标记及穿膜能力验证 | 第70-71页 |
| 1.2.5. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒处理细胞后miR-122水平变化的检测 | 第71-75页 |
| 1.2.6. MS-miR122 VLP及MS-miRNC VLP化学交联TAT穿透肽 | 第75-76页 |
| 1.2.7. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒与化学交联TAT的病毒样颗粒细胞毒性验证 | 第76-77页 |
| 1.2.8 光学显微镜下观察表面展示及化学交联TAT的重组病毒样颗粒介导的miR-122(miRNC)处理后细胞形态学变化 | 第77-78页 |
| 1.2.9 Transwell小室观察内含miRNA的重组VLPs处理后细胞迁移及侵袭能力 | 第78-79页 |
| 1.2.10. 流式细胞术检测内含miRNA的重组MS2 VLPs处理后细胞凋亡情况 | 第79页 |
| 1.2.11. Western Blot验证内含pre-miR122的VLPs处理细胞对靶蛋白的抑制情况 | 第79-81页 |
| 1.2.12. 裸鼠接种人肝癌细胞建立动物模型 | 第81-82页 |
| 1.2.13. 动物模型分组及给药 | 第82页 |
| 1.2.14. 给药后各实验组小鼠CT拍摄 | 第82页 |
| 1.2.15. 小鼠取瘤测量大小 | 第82页 |
| 1.2.16. 动物WB检测靶蛋白抑制情况 | 第82-83页 |
| 1.2.17. HE染色检测各处理组小鼠动物模型肿瘤生长情况 | 第83页 |
| 1.2.18. 免疫组化方法检测各处理组小鼠动物模型肿瘤生长情况 | 第83-84页 |
| 1.2.19. 统计学分析 | 第84页 |
| 2. 结果 | 第84-113页 |
| 2.1. 重组病毒样颗粒的表达和纯化 | 第84-86页 |
| 2.1.1. 丙烯葡聚糖凝胶层析纯化重组病毒样颗粒 | 第84-86页 |
| 2.1.2. 重组MS2 VLPs的蛋白定量 | 第86页 |
| 2.2. 表面展示TAT重组病毒样颗粒的鉴定 | 第86-89页 |
| 2.2.1. SDS-PAGE电泳鉴定表面展示TAT的重组病毒样颗粒 | 第86-87页 |
| 2.2.2. 电子显微镜鉴定重组病毒样颗粒 | 第87-89页 |
| 2.3. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒穿膜能力验证 | 第89-90页 |
| 2.4. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒处理细胞后miR-122水平变化情况 | 第90-92页 |
| 2.4.1. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒不同浓度、处理不同细胞系后miR-122水平变化情况 | 第90-91页 |
| 2.4.2. 表面展示TAT的重组病毒样颗粒处理Hep3B细胞后miR-122水平变化与时间的关系 | 第91-92页 |
| 2.5 MS-miR122 VLPs化学交联TAT后SDS-PAGE验证 | 第92页 |
| 2.6. 重组病毒样颗粒的细胞毒性及增殖实验 | 第92-95页 |
| 2.7. 光学显微镜下观察重组病毒样颗粒处理后细胞形态学变化 | 第95-97页 |
| 2.8. Transwell小室验证重组病毒样颗粒处理细胞效果 | 第97-99页 |
| 2.8.1. 重组病毒样颗粒处理细胞后迁移性实验验证 | 第97-98页 |
| 2.8.2. 重组病毒样颗粒处理细胞后侵袭性实验验证 | 第98-99页 |
| 2.9. 重组MS2 VLP处理后流式细胞术检测细胞凋亡 | 第99-104页 |
| 2.10. 重组MS2 VLP处理后Western Blot验证靶蛋白抑制情况 | 第104-106页 |
| 2.11. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤大小情况 | 第106-107页 |
| 2.12. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤CT结果 | 第107-108页 |
| 2.13. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤增长曲线 | 第108-110页 |
| 2.14. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤WB检测结果 | 第110页 |
| 2.15. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤HE染色结果 | 第110-112页 |
| 2.16. 重组病毒样颗粒处理裸鼠肝癌模型肿瘤免疫组化结果 | 第112-113页 |
| 3. 讨论 | 第113-116页 |
| 参考文献 | 第116-121页 |
| 论文综述 埃博拉出血热的早期诊断及病毒核酸的快速检测方法 | 第121-130页 |
| 参考文献 | 第127-130页 |
| 附录 | 第130-150页 |
| 附录1：pACYCDuet-1载体详细信息 | 第130-132页 |
| 附录2：表达载体pACYC-MS2-NP、pACYC-MS2-GP/L序列比对结果 | 第132-145页 |
| 附录3：p2MS2-TAT-miR-122、pMS-miR122重组质粒比对结果 | 第145-150页 |
| 致谢 | 第150-152页 |
| 个人简介 | 第152-153页 |
