| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第8-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-42页 |
| 1.1 文献综述 | 第17-40页 |
| 1.1.1 苹果轮纹病概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1.1 苹果轮纹病的发生及危害 | 第17-18页 |
| 1.1.1.2 苹果轮纹病的防治 | 第18-19页 |
| 1.1.2 芽胞杆菌生防功能与作用机制 | 第19-22页 |
| 1.1.2.1 抗生作用 | 第19-20页 |
| 1.1.2.2 空间和营养竞争 | 第20页 |
| 1.1.2.3 溶菌作用 | 第20-21页 |
| 1.1.2.4 诱导抗病性 | 第21-22页 |
| 1.1.3 芽胞杆菌脂肽类抗生素的研究进展 | 第22-37页 |
| 1.1.3.1 脂肽类抗生素的分类及结构 | 第22-26页 |
| 1.1.3.2 脂肽类抗生素生物合成机制和调控途径 | 第26-30页 |
| 1.1.3.3 脂肽类抗生素生物学功能 | 第30-37页 |
| 1.1.4 芽胞杆菌实现遗传操作的方法 | 第37-40页 |
| 1.2 研究目的与研究意义 | 第40页 |
| 1.3 研究内容与技术路线 | 第40-42页 |
| 第二章 B.amyloliquefaciens PG12防病效果检测 | 第42-49页 |
| 2.1 材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 菌株 | 第42页 |
| 2.1.2 苹果 | 第42页 |
| 2.1.3 培养基和溶液配制 | 第42-43页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第43页 |
| 2.2 方法 | 第43-45页 |
| 2.2.1 菌株活化 | 第43页 |
| 2.2.2 苹果轮纹病菌孢子悬液的制备及接种 | 第43-44页 |
| 2.2.3 平板对峙培养 | 第44页 |
| 2.2.4 扫描电镜样品制备程序 | 第44-45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 2.3.1 B.amyloliquefaciens PG12对苹果果实轮纹病的抑制效果 | 第45-46页 |
| 2.3.2 B.amyloliquefaciens PG12对苹果储藏期病害的抑制效果 | 第46页 |
| 2.3.3 B.amyloliquefaciens PG12对苹果轮纹病菌菌丝的抑制及致畸作用 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 B.amyloliquefaciens PG12主要抗菌活性物质的确证 | 第49-81页 |
| 3.1 材料 | 第50-56页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第50-51页 |
| 3.1.2 引物 | 第51-53页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第53-54页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第54-56页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第56页 |
| 3.2 方法 | 第56-63页 |
| 3.2.1 苹果轮纹病菌培养及孢子悬液的制备 | 第56页 |
| 3.2.2 细菌无菌上清液的制备及抑菌活性检测 | 第56-57页 |
| 3.2.3 脂肽类抗生素粗提物的制备 | 第57页 |
| 3.2.4 基因组DNA的提取 | 第57-58页 |
| 3.2.5 引物设计 | 第58页 |
| 3.2.6 PCR扩增的体系与条件 | 第58-59页 |
| 3.2.7 SOE-PCR扩增的体系与条件 | 第59页 |
| 3.2.8 PCR产物纯化与连接 | 第59页 |
| 3.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备及热击转化 | 第59-60页 |
| 3.2.10 质粒的体内甲基化修饰 | 第60页 |
| 3.2.11 解淀粉芽胞杆菌感受态细胞的制备及电击转化 | 第60-61页 |
| 3.2.12 重组质粒热击转化大肠杆菌 | 第61页 |
| 3.2.13 质粒DNA的提取 | 第61-62页 |
| 3.2.14 利用木糖诱导的ComK表达载体进行基因敲除 | 第62页 |
| 3.2.15 测序 | 第62页 |
| 3.2.16 脂肽类抗生素毒力测定 | 第62页 |
| 3.2.17 薄层层析-生物自显影(TLC-bioautography analysis) | 第62页 |
| 3.2.18 脂肽类抗生素分离纯化及HPLC分析 | 第62-63页 |
| 3.2.19 电喷射串联质谱分析(ESI-Q-TOF MS/MS) | 第63页 |
| 3.2.20 生长曲线的测定 | 第63页 |
| 3.2.21 抑菌活性测定 | 第63页 |
| 3.3 结果与分析 | 第63-78页 |
| 3.3.1 紫外线照射、蛋白酶K、热处理和酸碱处理对B.amyloliquefaciens PG12无菌上清液抑菌活性的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.2 B.amyloliquefaciens PG12无菌上清液及脂肽类抗生素粗提物对轮纹病菌菌丝生长的抑制作用 | 第64页 |
| 3.3.3 脂肽类抗生素粗提物对轮纹病菌的抑制作用 | 第64-65页 |
| 3.3.4 主要脂肽类抗生素家族合成基因 | 第65页 |
| 3.3.5 脂肽类抗生素对苹果轮纹病菌的毒力测定 | 第65-66页 |
| 3.3.6 B.amyloliquefaciens PG12脂肽类抗生素分离纯化 | 第66-68页 |
| 3.3.7 B.amyloliquefaciens PG12伊枯草素A氨基酸序列分析 | 第68页 |
| 3.3.8 感受态制备培养基、OD600值、弱化剂、质粒对B.amyloliquefaciens PG12转化效率的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.9 将改进的方法应用于其他解淀粉芽胞杆菌 | 第69-70页 |
| 3.3.10 脂肽类抗生素合成基因突变体的构建 | 第70-73页 |
| 3.3.11 B.amyloliquefaciens PG12及突变体的生长曲线 | 第73页 |
| 3.3.12 B.amyloliquefaciens PG12及突变体脂肽类抗生素高效液相色谱分析 | 第73-75页 |
| 3.3.13 B.amyloliquefaciens PG12及突变体抗苹果轮纹病菌活性 | 第75-78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-80页 |
| 3.5 小结 | 第80-81页 |
| 第四章 B.amyloliquefaciens PG12脂肽类抗生素对多细胞行为的影响 | 第81-93页 |
| 4.1 材料 | 第81-83页 |
| 4.1.1 苹果 | 第81页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第81-82页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第82页 |
| 4.1.4 培养基和溶液的配制 | 第82-83页 |
| 4.1.5 主要实验仪器 | 第83页 |
| 4.2 方法 | 第83-84页 |
| 4.2.1 苹果轮纹病菌孢子悬液的制备 | 第83页 |
| 4.2.2 脂肽类抗生素粗提物的制备 | 第83页 |
| 4.2.3 生物膜测定 | 第83页 |
| 4.2.5 运动性测定 | 第83-84页 |
| 4.2.6 苹果果实生物测定 | 第84页 |
| 4.3 结果与分析 | 第84-91页 |
| 4.3.1 B.amyloliquefaciens PG12及突变体生物膜形成能力 | 第84-87页 |
| 4.3.2 B.amyloliquefaciens PG12及突变体运动性 | 第87-89页 |
| 4.3.3 B.amyloliquefaciens PG12及突变体在苹果果实上的生物测定 | 第89-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-92页 |
| 4.5 小结 | 第92-93页 |
| 第五章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 5.1 结论 | 第93页 |
| 5.2 本研究的创新性 | 第93-94页 |
| 5.3 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 附录 | 第106-114页 |
| 附录 B.amyloliquefaciens PG12脂肽类抗生素部分合成基因序列 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 作者简历 | 第116-117页 |
