| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 艰难梭菌及其致病机制 | 第16-19页 |
| 1.1.1 艰难梭菌简介及其感染现状 | 第16-17页 |
| 1.1.2 艰难梭菌的致病因子 | 第17-18页 |
| 1.1.3 毒素A和毒素B的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2 细胞死亡及其研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.2.2 自噬 | 第21-22页 |
| 1.2.3 免疫原性细胞死亡（Immunogenic cell death，ICD） | 第22-23页 |
| 1.2.4 坏死 | 第23-24页 |
| 1.3 艰难梭菌毒素诱导的细胞死亡 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题的研究目的、意义与主要内容 | 第25-28页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第25-26页 |
| 1.4.3 主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 活性氧簇在TcdB诱导的细胞凋亡中的作用 | 第28-56页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-34页 |
| 2.2.1 细胞和毒素 | 第29页 |
| 2.2.2 主要设备与耗材 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要药品与试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.4 主要实验用溶液配制 | 第31-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第34页 |
| 2.3.2 细胞复苏 | 第34-35页 |
| 2.3.3 细胞传代 | 第35页 |
| 2.3.4 细胞冻存 | 第35页 |
| 2.3.5 重组艰难梭菌毒素B的表达纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.6 亲和层析纯化蛋白 | 第36-37页 |
| 2.3.7 细胞病变效应及细胞毒性检测 | 第37页 |
| 2.3.8 细胞内活性氧的检测 | 第37页 |
| 2.3.9 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 | 第37-38页 |
| 2.3.10 Sub-G1 法检测细胞凋亡 | 第38-39页 |
| 2.3.11 DNA ladder | 第39-40页 |
| 2.3.12 Western blot | 第40-42页 |
| 2.3.13 罗丹明检测胞内线粒体膜电位的改变 | 第42-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-55页 |
| 2.4.1 重组艰难梭菌毒素B(rTcdB)的表达纯化及其性质鉴定 | 第43-46页 |
| 2.4.2 rTcdB处理诱导细胞内ROS的水平升高 | 第46-47页 |
| 2.4.3 ROS参与r TcdB引起的细胞凋亡 | 第47-50页 |
| 2.4.4 NAC保护艰难梭菌毒素B引起的细胞死亡效应的机制 | 第50-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 内质网应激在TcdB诱导的细胞凋亡中的作用 | 第56-80页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 实验材料 | 第57-59页 |
| 3.2.1 细胞和毒素 | 第57页 |
| 3.2.2 主要设备及耗材 | 第57页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 3.2.4 主要溶液配制 | 第58页 |
| 3.2.5 引物 | 第58-59页 |
| 3.3 实验方法 | 第59-64页 |
| 3.3.1 细胞培养、传代、复苏及冻存方法 | 第59页 |
| 3.3.2 重组突变毒素B（mrTcdB）的表达纯化 | 第59页 |
| 3.3.3 实时定量PCR （Real-time PCR） | 第59-61页 |
| 3.3.4 逆转录PCR | 第61-62页 |
| 3.3.5 Western Blot检测蛋白表达 | 第62页 |
| 3.3.6 细胞凋亡检测 | 第62页 |
| 3.3.7 细胞病变和细胞毒性效应 | 第62-63页 |
| 3.3.8 乳酸脱氢酶（LDH）测试 | 第63-64页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第64-78页 |
| 3.4.1 重组突变毒素B（mrTcdB）的表达、纯化与细胞毒性和病变效应测定 | 第64-65页 |
| 3.4.2 rTcd B 诱导 ER stress | 第65-68页 |
| 3.4.3 艰难梭菌毒素B对凋亡性ER stress分子标记物的影响 | 第68-71页 |
| 3.4.4 rTcdB引起的ER stress是葡萄糖基转移酶非依赖的 | 第71-72页 |
| 3.4.5 Salubrinal对rTcdB中毒细胞的保护效应及其机制研究 | 第72-78页 |
| 3.5 小结 | 第78-80页 |
| 第四章 ROS和ER stress在TcdB诱导的免疫原性细胞死亡中的作用 | 第80-96页 |
| 4.1 引言 | 第80-84页 |
| 4.1.1 ICD相关DAMPs简介 | 第80-83页 |
| 4.1.2 ICD诱导剂 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料 | 第84-85页 |
| 4.2.1 细胞和毒素 | 第84页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第84-85页 |
| 4.2.3 主要实验用试剂配制 | 第85页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第85页 |
| 4.3 主要实验方法 | 第85-89页 |
| 4.3.1 Western blot检测上清和全细胞蛋白 | 第85-86页 |
| 4.3.2 细胞凋亡状态分析 | 第86-87页 |
| 4.3.3 CRT膜转位分析 | 第87-88页 |
| 4.3.4 小鼠免疫模型的建立 | 第88-89页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第89-95页 |
| 4.4.1 ROS和ER stress对r TcdB中毒的CT26 细胞凋亡的影响 | 第89-90页 |
| 4.4.2 ROS和ER stress在r TcdB中毒的CT26 细胞肿瘤免疫模型中的作用 | 第90-93页 |
| 4.4.3 ROS影响r TcdB在肿瘤细胞中诱导的ICD的相关机制 | 第93-95页 |
| 4.5 小结 | 第95-96页 |
| 结论与展望 | 第96-98页 |
| 结论 | 第96页 |
| 论文创新点 | 第96页 |
| 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-113页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 附件 | 第115页 |
