| 致谢 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 序言 | 第13-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-38页 |
| 2.1 主要实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17页 |
| 2.3 实验设备 | 第17-18页 |
| 2.4 实验方法 | 第18-38页 |
| 2.4.1 质粒构建 | 第18-27页 |
| 2.4.1.1 野生型MGMT cDNA的克隆 | 第18-22页 |
| 2.4.1.2 MGMT定点突变 | 第22-23页 |
| 2.4.1.3 MGMT(P140K)与CMV启动子连接 | 第23-24页 |
| 2.4.1.4 构建表达载体pWPT2bF9-MGMT | 第24-27页 |
| 2.4.2 细胞培养 | 第27-29页 |
| 2.4.2.1 293T细胞培养 | 第27页 |
| 2.4.2.2 Dami细胞培养 | 第27页 |
| 2.4.2.3 小鼠造血干细胞的收集与培养 | 第27-29页 |
| 2.4.3 慢病毒制备 | 第29-34页 |
| 2.4.3.1 质粒宏量抽提 | 第29-30页 |
| 2.4.3.2 磷酸钙法制备慢病毒 | 第30页 |
| 2.4.3.3 慢病毒颗粒数测定 | 第30-32页 |
| 2.4.3.4 慢病毒整合数测定 | 第32-34页 |
| 2.4.4 慢病毒感染细胞实验 | 第34-35页 |
| 2.4.4.1 感染293T细胞 | 第34页 |
| 2.4.4.2 感染Dami细胞 | 第34-35页 |
| 2.4.5 MGMT(P140K)功能测定实验 | 第35-36页 |
| 2.4.5.1 不同浓度BCNU对细胞的杀伤作用 | 第36页 |
| 2.4.5.2 MGMT(P140K)对细胞的保护作用 | 第36页 |
| 2.4.6 FIX ELISA | 第36-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-48页 |
| 3.1 载体的构建与鉴定 | 第38-41页 |
| 3.1.1 MGMT cDNA的克隆 | 第38页 |
| 3.1.2 MGMT cDNA的定点突变 | 第38-39页 |
| 3.1.3 MGMT(P140K)亚克隆至PCIneo | 第39-40页 |
| 3.1.4 CMV—MGMT(P140K)连接至pWPT2bF9 | 第40-41页 |
| 3.2 GFP—LV慢病毒制备与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.1 GFP慢病毒(GFP—LV)的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.2 GFP慢病毒(GFP—LV)的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 2bF9-MGMT(P140K)-LV制备与FIX的表达结果 | 第43-45页 |
| 3.3.1 2bF9-MGMT(P140K)慢病毒的制备 | 第43页 |
| 3.3.2 2bF9-MGMT(P140K)-LV可成功感染Dami细胞并表达FIX | 第43-45页 |
| 3.4 293T细胞药物筛选 | 第45-46页 |
| 3.5 Dami细胞药物筛选条件的进一步探索 | 第46-47页 |
| 3.6 MGMT(P140K)对小鼠骨髓造血干细胞的保护作用 | 第47-48页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第48-50页 |
| 4.1 讨论 | 第48-49页 |
| 4.2 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 附录 实验溶液的配置 | 第52-55页 |
| 综述 | 第55-63页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
