| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写一览表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 共抑制分子的概述 | 第15-16页 |
| 1.2 共抑制分子与自身免疫疾病 | 第16-17页 |
| 1.3 共抑制分子VISTA | 第17-18页 |
| 1.4 EAE模型研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.6 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 VISTA胞外段重组蛋白原核表达载体构建及蛋白诱导表达 | 第21-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 原核表达载体pET22b-VISTA的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2 重组质粒转化到表达菌株及VISTA胞外段重组蛋白诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.3 VISTA胞外段重组蛋白的可溶性分析 | 第25页 |
| 2.2.4 VISTA胞外段重组蛋白包涵体变性及纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.5 VISTA胞外段重组蛋白包涵体复性 | 第26页 |
| 2.2.6 VISTA胞外段重组蛋白的Western Blot验证 | 第26页 |
| 2.2.7 VISTA胞外段重组蛋白活性验证 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 重组质粒pET22b-VISTA的构建及验证 | 第27-29页 |
| 2.3.2 VISTA胞外段重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第29页 |
| 2.3.3 VISTA胞外段重组蛋白包涵体纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.4 VISTA胞外段重组蛋白包涵体复性及Western Blot验证 | 第30-31页 |
| 2.3.5 VISTA胞外段重组蛋白活性验证 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 3 VISTA胞外段重组蛋白真核表达载体的构建及蛋白表达 | 第34-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.3 常用试剂配制 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.2.1 真核表达载体pFUSE-VISTA-mIgG2a的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测VISTA-IgG2a融合蛋白的mRNA水平 | 第38-39页 |
| 3.2.3 VISTA-mIgG2a融合蛋白的表达及Western Blot鉴定 | 第39页 |
| 3.2.4 酵母表达载体pPICZaA-VISTA的构建 | 第39页 |
| 3.2.5 重组菌株GS115/pPICZaA-VISTA的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.6 重组菌株GS115/pPICZaA-VISTA的蛋白诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 重组质粒pFUSE-VISTA-mIgG2a的构建及验证 | 第41-43页 |
| 3.3.2 重组质粒pFUSE-VISTA-mIgG2a蛋白表达验证 | 第43-44页 |
| 3.3.3 酵母表达重组载体pPICZaA-VISTA的构建及验证 | 第44-46页 |
| 3.3.4 重组菌株GS115/pPICZaA-VISTA的菌液PCR验证 | 第46页 |
| 3.3.5 VISTA胞外段重组蛋白的诱导表达鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4 EAE模型构建及VISTA基因在病程中的表达变化 | 第49-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 主要试剂耗材 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.3 常用试剂配制 | 第50页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 4.2.1 EAE小鼠模型构建 | 第50-51页 |
| 4.2.2 EAE小鼠体重监测及神经功能评分 | 第51页 |
| 4.2.3 病理组织学检测 | 第51-52页 |
| 4.2.4 EAE小鼠脾脏及脑组织总RNA提取 | 第52页 |
| 4.2.5 VISTA荧光定量PCR（Real-time PCR）引物的设计及验证 | 第52-53页 |
| 4.2.6 EAE小鼠不同病程时期脾脏、脑组织VISTA mRNA的表达 | 第53页 |
| 4.2.7 数据统计分析 | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-60页 |
| 4.3.1 EAE小鼠的行为及神经功能评分 | 第54-55页 |
| 4.3.2 病理组织学检测 | 第55-57页 |
| 4.3.3 VISTA Real-time PCR引物设计及扩增效率验证 | 第57-58页 |
| 4.3.4 EAE小鼠不同病程时期脾脏、脑组织VISTA的表达 | 第58-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 VISTA胞外段重组蛋白对EAE小鼠治疗作用的研究 | 第62-72页 |
| 5.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 EAE小鼠模型给药 | 第62-63页 |
| 5.2.2 EAE小鼠的体重监测及神经功能评分 | 第63页 |
| 5.2.3 EAE小鼠的病理组织学检测 | 第63页 |
| 5.2.4 Real-time PCR检测脾脏、脑组织IFN-γ 的表达 | 第63-64页 |
| 5.2.5 数据统计分析 | 第64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-70页 |
| 5.3.1 VISTA胞外段重组蛋白对EAE小鼠病情的影响 | 第64-66页 |
| 5.3.2 病理组织学检测 | 第66-69页 |
| 5.3.3 脾脏及脑组织中IFN-γ 的表达 | 第69-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 6 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
