| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 1.实验材料 | 第15-19页 |
| 1.1 主要材料试剂 | 第15-16页 |
| 1.2 试剂配制 | 第16-17页 |
| 1.3 仪器设备 | 第17-19页 |
| 2.实验方法 | 第19-31页 |
| 2.1 细胞培养实验 | 第19-22页 |
| 2.1.1 细胞生长条件 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞传代 | 第19页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第19-20页 |
| 2.1.5 细胞转染 | 第20页 |
| 2.1.6 慢病毒感染实验 | 第20-21页 |
| 2.1.7 测定细胞生长曲线 | 第21页 |
| 2.1.8 测定细胞迁移实验 | 第21页 |
| 2.1.9 测定细胞侵袭实验 | 第21-22页 |
| 2.2 TOP10/BL21(DE3)等感受态细胞的制备 | 第22页 |
| 2.3 PTEN-LONG表达质粒的构建 | 第22-27页 |
| 2.3.1 引物设计及目的基因PCR | 第22-23页 |
| 2.3.2 胶回收目的基因 | 第23-24页 |
| 2.3.3 目的基因两端加A | 第24页 |
| 2.3.4 连接pGEM-T easy Vector | 第24页 |
| 2.3.5 蓝白斑筛选 | 第24-25页 |
| 2.3.6 普通质粒的提取 | 第25页 |
| 2.3.7 无内毒素质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.8 目的基因与表达载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.4 PTEN-LONG蛋白的表达及分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.4.1 PTEN-Long蛋白原核诱导表达 | 第27页 |
| 2.4.2 PTEN-Long蛋白真核表达 | 第27页 |
| 2.4.3 PTEN-Long蛋白的分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.5WESTERN-BLOT实验验证 | 第28-31页 |
| 2.5.1 收集蛋白样品 | 第28页 |
| 2.5.2 BCA试剂盒测蛋白浓度 | 第28-29页 |
| 2.5.3 Western-blot实验 | 第29-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-43页 |
| 3.1 原核诱导表达结果 | 第31-33页 |
| 3.1.1 构建原核载体pET28b(+)/pGEX-6P1PTEN-Long质粒结果 | 第31-33页 |
| 3.1.2 原核诱导表达结果 | 第33页 |
| 3.2 真核载体及蛋白表达结果 | 第33-35页 |
| 3.2.1 构建PTEN-Long-pcDNA3.1(+)-MYC-His过表达质粒结果 | 第33-35页 |
| 3.2.2 真核表达载体表达PTEN-Long结果 | 第35页 |
| 3.3 PTEN-LONG蛋白的分离纯化 | 第35-36页 |
| 3.4 PTEN-LONG蛋白的功能试验 | 第36-43页 |
| 3.4.1 PTEN及对照慢病毒稳定整合U87细胞 | 第36-37页 |
| 3.4.2 PTEN-Long蛋白对细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.3 PTEN-Long蛋白对细胞迁移的影响 | 第38-40页 |
| 3.4.4 PTEN-Long蛋白对细胞侵袭的影响 | 第40-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 综述 | 第49-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
