摘要 | 第5-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
英文缩写索引 | 第14-15页 |
1 绪论 | 第15-19页 |
1.1 伤寒沙门菌简介 | 第15-16页 |
1.2 水平获得的外来基因简介 | 第16页 |
1.3 mig-14 基因简介 | 第16-19页 |
2 研究目的、研究方案、技术路线、材料方法 | 第19-49页 |
2.1 研究目的 | 第19页 |
2.2 研究方案 | 第19-20页 |
2.3 技术路线 | 第20-22页 |
2.3.1 探索mig-14 普通培养条件下低表达的机制 | 第20-21页 |
2.3.2 探索mig-14 在PB刺激下的表达机制 | 第21页 |
2.3.3 IHF 与 Mig-14 对 SPI-1 的调控作用关系 | 第21-22页 |
2.4 实验材料 | 第22-31页 |
2.4.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
2.4.2 主要试剂及材料 | 第23页 |
2.4.3 主要溶液 | 第23-30页 |
2.4.4 主要仪器 | 第30-31页 |
2.5 实验方法 | 第31-49页 |
2.5.1 伤寒沙门菌基因缺失变异株的制备 | 第31-38页 |
2.5.2 实时定量PCR检测mig-14 mRNA水平 | 第38-41页 |
2.5.3 mig-14 的lacZ基因融合实验 | 第41-43页 |
2.5.4 Western blot免疫印迹法检测Mig-14 表达水平 | 第43-44页 |
2.5.5 蛋白表达 | 第44-46页 |
2.5.6 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第46-47页 |
2.5.7 高渗早期IHF(HimA/Him D)对mig-14 及SPI-1 的影响 | 第47-49页 |
3 实验结果 | 第49-71页 |
3.1 沉默蛋白HNS、Hha、YdgT在体外普通培养条件下抑制mig-14 的转录表达 | 第49-58页 |
3.1.1 伤寒沙门菌hns、hha、ydgT缺陷变异株的制备 | 第49-53页 |
3.1.2 伤寒沙门菌hns高表达株的构建 | 第53-55页 |
3.1.3 qRT-PCR检测mig-14 mRNA水平 | 第55-56页 |
3.1.4 沉默蛋白HNS能直接作用于mig-14 启动子 | 第56-58页 |
3.2 PB刺激下mig-14 的激活依赖调节因子Fis、HilD、IHF、OmpR | 第58-62页 |
3.2.1 伤寒沙门菌hilD、himA、himD缺陷变异株的制备 | 第58-59页 |
3.2.2 PB刺激下各菌株中mig-14 mRNA水平 | 第59-60页 |
3.2.3 Western blot免疫印迹法检测PB刺激下各菌株中Mig-14 表达水平 | 第60-61页 |
3.2.4 lacZ报告基因融合实验 | 第61-62页 |
3.3 高渗早期宿主整合因子(IHF)激活mig-14 的转录表达可增强对SPI-1的调节 | 第62-71页 |
3.3.3 IHF的α亚基HimA能与mig-14 启动子区域结合 | 第65-67页 |
3.3.4 高渗早期IHF激活iagA的转录 | 第67-69页 |
3.3.5 高渗早期Mig-14 对iagA的激活依赖IHF | 第69-71页 |
4 讨论 | 第71-75页 |
5 主要结论及展望 | 第75-76页 |
5.1 主要结论 | 第75页 |
5.2 展望 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-82页 |
致谢 | 第82-83页 |
攻读硕士学位期间发表的文章 | 第83页 |