| 主要缩略语中英文对照 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-12页 |
| 1.1.1 番茄研究进展 | 第11页 |
| 1.1.2 番茄抗病毒研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 TYLCV病研究进展 | 第12-21页 |
| 1.2.1 TYLCV病的发生分布 | 第12页 |
| 1.2.2 TYLCV病的发病症状 | 第12-13页 |
| 1.2.3 TYLCV病的病原 | 第13页 |
| 1.2.4 TYLCV的基因组结构及功能基因 | 第13页 |
| 1.2.5 TYLCV病的传播途径 | 第13-14页 |
| 1.2.6 TYLCV的侵染过程 | 第14-16页 |
| 1.2.7 TYLCV病的检测方法 | 第16-17页 |
| 1.2.8 TYLCV病的防治 | 第17-18页 |
| 1.2.9 番茄抗TYLCV病的育种方法 | 第18-19页 |
| 1.2.10 TYLCV病的抗病鉴定 | 第19-21页 |
| 1.3 RNAi技术在植物抗病的应用 | 第21-24页 |
| 1.3.1 RNAi研究背景 | 第21页 |
| 1.3.2 RNA沉默机制 | 第21-22页 |
| 1.3.3 RNAi在植物中的沉默类型 | 第22页 |
| 1.3.4 RNA沉默的病毒抑制子 | 第22-23页 |
| 1.3.5 RNAi在植物研究和育种中的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第24-27页 |
| 1.4.1 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 1.4.2 研究技术路线 | 第25页 |
| 1.4.3 研究关键技术 | 第25页 |
| 1.4.4 研究特色之处 | 第25-26页 |
| 1.4.5 研究创新点 | 第26-27页 |
| 第2章 TYLCY嵌合基因的克隆及RNAi载体构建 | 第27-59页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第27页 |
| 2.1.2 引物 | 第27-28页 |
| 2.1.3 试验培养基及溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 试验内容与方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 TYLCV嵌合基因目标序列的选择 | 第29页 |
| 2.2.2 中国不同地区番茄(感病)的TYLCV序列收集 | 第29-30页 |
| 2.2.3 目标基因同源性分析 | 第30页 |
| 2.2.4 TYLCV嵌合基因的克隆 | 第30-33页 |
| 2.2.5 内含子的扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.6 番茄PDS基因的扩增 | 第34页 |
| 2.2.7 RNAi载体和目的基因连接及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-58页 |
| 2.3.1 番茄基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 AV1,AC1,AC3基因片段的选定 | 第36-39页 |
| 2.3.3 AV1,AC1,AC3基因片段的克隆 | 第39页 |
| 2.3.4 AV1,AC1,AC3基因片段的鉴定 | 第39-41页 |
| 2.3.5 嵌合基因的克隆及鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3.6 内含子片段RTM1的克隆及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.7 番茄PDS基因片段的克隆及鉴定 | 第44-46页 |
| 2.3.8 RNAi载体的构建 | 第46-58页 |
| 2.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第3章 RNAi载体在番茄植株中的瞬时表达 | 第59-70页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第59页 |
| 3.1.2 试验培养基及溶液的配制 | 第59页 |
| 3.1.3 引物 | 第59-60页 |
| 3.2 试验内容与方法 | 第60-62页 |
| 3.2.1 番茄幼苗培育 | 第60页 |
| 3.2.2 工程菌的准备 | 第60页 |
| 3.2.3 工程农杆菌的注射 | 第60页 |
| 3.2.4 转化片段的检测 | 第60-61页 |
| 3.2.5 番茄抗病性鉴定 | 第61-62页 |
| 3.3 结果与分析 | 第62-69页 |
| 3.3.1 工程农杆菌的菌液PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3.2 农杆菌介导瞬时表达的可行性 | 第63页 |
| 3.3.3 番茄品种(合作908)是TYLCV敏感型 | 第63-65页 |
| 3.3.4 PCR检测 | 第65-66页 |
| 3.3.5 siRNA的检测 | 第66-67页 |
| 3.3.6 番茄植株抗病性检测 | 第67-68页 |
| 3.3.7 TYLCV的DNA检测 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 第4章 RNAi载体在番茄植株中的稳转表达 | 第70-84页 |
| 4.1 试验材料与试剂 | 第70-72页 |
| 4.1.1 菌株及材料 | 第70页 |
| 4.1.2 MS培养基及相关试剂的配制 | 第70-72页 |
| 4.2 试验方法 | 第72-74页 |
| 4.2.1 番茄再生体系的建立 | 第72-73页 |
| 4.2.2 农杆菌LBA4404侵染液的制备 | 第73页 |
| 4.2.3 番茄转化体系优化 | 第73页 |
| 4.2.4 T0代转基因株系的生根 | 第73-74页 |
| 4.2.5 T0代转基因株系的抗病性鉴定 | 第74页 |
| 4.3 结果与分析 | 第74-82页 |
| 4.3.1 番茄种子灭菌时间的优化 | 第74页 |
| 4.3.2 不同激素配比对番茄愈伤组织和不定芽诱导的影响 | 第74-76页 |
| 4.3.3 激素类型和浓度对番茄外植体生根的影响 | 第76-78页 |
| 4.3.4 抗生素使用浓度的筛选 | 第78-79页 |
| 4.3.5 不同处理对番茄转化效率的影响 | 第79页 |
| 4.3.6 T0代转基因株系的检测 | 第79-80页 |
| 4.3.7 T0代转基因株系的抗病性鉴定 | 第80-82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-84页 |
| 结论与创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| Abstract | 第96-97页 |
| 附录 | 第98-106页 |
| 附图 | 第106-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第118页 |
