| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.禽多杀性巴氏杆菌病 | 第11-13页 |
| 1.1 病原学特性 | 第11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 临床症状及病理变化 | 第12页 |
| 1.4 禽多杀性巴氏杆菌病诊断技术 | 第12-13页 |
| 2.多杀性巴氏杆菌的毒力因子 | 第13-15页 |
| 2.1 荚膜（Capsule） | 第13-14页 |
| 2.2 脂多糖(LPS) | 第14页 |
| 2.3 外膜蛋白(OMPs) | 第14-15页 |
| 2.4 粘附因子 | 第15页 |
| 2.5 相关的酶 | 第15页 |
| 3.多杀性巴氏杆菌疫苗的研究进展 | 第15-18页 |
| 3.1 弱毒疫苗 | 第15-16页 |
| 3.2 灭活菌苗 | 第16页 |
| 3.3 亚单位疫苗 | 第16-17页 |
| 3.4 DNA疫苗 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1.1 菌株、质粒与实验动物 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂与器材 | 第19页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第19页 |
| 1.2.2 主要器材 | 第19页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| 1.3.1 原核表达试剂 | 第19-20页 |
| 1.3.2 蛋白质电泳试剂 | 第20页 |
| 1.3.3 蛋白提取、纯化溶液 | 第20页 |
| 1.3.4 Western-blot试剂 | 第20-21页 |
| 1.3.5 ELISA试剂配制 | 第21页 |
| 1.4 6-PGD蛋白原核表达载体的构建与序列分析 | 第21-25页 |
| 1.4.1 6-PGD引物设计 | 第21页 |
| 1.4.2 C_(48-1)菌株基因组提取 | 第21-22页 |
| 1.4.3 PCR扩增目的条带 | 第22页 |
| 1.4.4 PCR产物胶回收 | 第22页 |
| 1.4.5 目的片段与PET-28a载体的连接 | 第22-23页 |
| 1.4.6 连接产物转化至DH5α | 第23页 |
| 1.4.7 重组质粒的提取 | 第23-24页 |
| 1.4.8 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| 1.4.9 重组质粒的测序 | 第25页 |
| 1.5 6-PGD蛋白表达及纯化 | 第25-27页 |
| 1.5.1 重组质粒转化至BL21(DE3)（同 1.4.6） | 第25页 |
| 1.5.2 重组质粒的提取（同 1.4.7） | 第25页 |
| 1.5.3 重组质粒的鉴定（同 1.4.8） | 第25页 |
| 1.5.4 重组质粒在BL21中的诱导表达及可溶性检测 | 第25-26页 |
| 1.5.5 重组蛋白免疫原性检测 | 第26页 |
| 1.5.6 蛋白纯化、浓缩 | 第26-27页 |
| 1.6 6-PGD蛋白间接ELISA方法的初步建立 | 第27-29页 |
| 1.6.1 间接ELISA操作步骤 | 第27页 |
| 1.6.2 抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第27-28页 |
| 1.6.3 抗原包被条件选择 | 第28页 |
| 1.6.4 最佳封闭液的选择 | 第28页 |
| 1.6.5 间接 ELISA 反应时间的确定 | 第28页 |
| 1.6.8 阴性血清临界值的确定 | 第28页 |
| 1.6.9 特异性试验 | 第28-29页 |
| 1.6.10 重复性试验 | 第29页 |
| 1.6.11 ELISA方法的初步应用 | 第29页 |
| 1.7 动物免疫保护试验 | 第29-31页 |
| 1.7.1 灭活菌的制备 | 第29页 |
| 1.7.2 疫苗的制备 | 第29页 |
| 1.7.3 动物免疫 | 第29-30页 |
| 1.7.4 免疫动物血清抗体水平检测 | 第30页 |
| 1.7.5 攻毒保护试验 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-43页 |
| 2.1 6-PGD蛋白原核表达载体的构建与序列分析 | 第31-32页 |
| 2.1.1 PCR扩增目的条带 | 第31页 |
| 2.1.2 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.1.3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.1.4 重组质粒测序结果 | 第32页 |
| 2.2 6-PGD蛋白表达及纯化 | 第32-36页 |
| 2.2.1 重组质粒转化至BL21的PCR及双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.2 重组质粒在BL21中诱导表达及可溶性检测 | 第33-35页 |
| 2.2.3 重组蛋白免疫原性检测 | 第35页 |
| 2.2.4 目的蛋白的纯化、浓缩 | 第35-36页 |
| 2.3 6-PGD蛋白间接ELISA方法的初步建立 | 第36-41页 |
| 2.3.1 抗原最佳包被浓度和血清稀释度的确定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 抗原包被条件选择 | 第37页 |
| 2.3.3 最佳封闭液的选择 | 第37页 |
| 2.3.4 间接ELISA反应时间的确定 | 第37-38页 |
| 2.3.5 阴性临界值的确定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 特异性试验 | 第39页 |
| 2.3.7 重复性试验 | 第39-40页 |
| 2.3.8 间接ELISA初步应用 | 第40-41页 |
| 2.4 动物免疫保护试验 | 第41-43页 |
| 2.4.1 灭活菌的制备 | 第41页 |
| 2.4.2 疫苗的制备 | 第41页 |
| 2.4.3 间接ELISA检测血清抗体水平 | 第41-42页 |
| 2.4.4 攻毒保护试验 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 3.1 重组表达载体的构建及重组表达蛋白的纯化 | 第43页 |
| 3.2 间接ELISA检测方法的初步建立 | 第43-44页 |
| 3.3 重组蛋白 6-PGD免疫效果的评价 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第53页 |
