| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 维生素B_6及其在生物体内的作用 | 第10-11页 |
| 1.2 生物体中VB_6的合成途径 | 第11-12页 |
| 1.3 PLK基因结构研究进展 | 第12-14页 |
| 1.4 PLK晶体结构研究进展 | 第14-16页 |
| 1.5 家蚕VB_6研究进展 | 第16页 |
| 1.6 荧光定量PCR技术 | 第16-18页 |
| 1.7 western blot技术 | 第18-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2.2.1. PLK在家蚕五龄幼虫各组织中转录水平的研究 | 第19页 |
| 2.2.2. PLK在家蚕不同发育时期及五龄幼虫中表达水平的研究 | 第19-20页 |
| 2.3 技术路线 | 第20页 |
| 2.4 课题来源 | 第20-21页 |
| 第3章 材料与方法 | 第21-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第21页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第21-25页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第21页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 3.2.3 实验中常用试剂配方 | 第22-25页 |
| 3.3 实验方法 | 第25-32页 |
| 3.3.1 总RNA的提取和检测 | 第25-26页 |
| 3.3.2 RNA反转录为cDNA | 第26页 |
| 3.3.3 荧光定量PCR引物的设计 | 第26-27页 |
| 3.3.4 PLK在家蚕中转录水平的研究 | 第27页 |
| 3.3.5 融合蛋白的表达与纯化 | 第27-29页 |
| 3.3.6 多克隆抗体的制备 | 第29页 |
| 3.3.7 抗体的效价测定 | 第29页 |
| 3.3.8 Western blot检测抗体特异性 | 第29-30页 |
| 3.3.9 家蚕总蛋白的提取及定量 | 第30页 |
| 3.3.10 PLK在家蚕中表达水平的研究 | 第30-32页 |
| 第4章 结果与分析 | 第32-39页 |
| 4.1 RNA的提取和检测 | 第32页 |
| 4.1.1 RNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 4.1.2 紫外分光光度法检测RNA纯度 | 第32页 |
| 4.2 cDNA第一链的浓度测定 | 第32-33页 |
| 4.3 PLK在家蚕中转录水平的研究 | 第33-35页 |
| 4.3.1 PCR反应条件的优化 | 第33-34页 |
| 4.3.2 五龄幼虫各组织RT产物的荧光定量PCR分析 | 第34-35页 |
| 4.4 重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 4.5 兔多克隆抗体的特异性鉴定 | 第36页 |
| 4.6 家蚕组织总蛋白粗提液的制备 | 第36页 |
| 4.7 PLK在家蚕组织中表达水平的研究 | 第36-39页 |
| 4.7.1 五龄幼虫各组织中PLK表达量的比较 | 第36-37页 |
| 4.7.2 五龄期表皮及马氏管组织中的PLK检测 | 第37页 |
| 4.7.3 家蚕发育过程中PLK表达量的变化 | 第37-39页 |
| 第5章 讨论 | 第39-42页 |
| 5.1 Trizol法提取RNA | 第39页 |
| 5.2 荧光定量PCR数据处理方法 | 第39页 |
| 5.3 重组蛋白的纯化方式 | 第39-40页 |
| 5.4 Western blotting检测 | 第40页 |
| 5.5 PLK转录与表达水平个别组织差异形成的可能原因 | 第40页 |
| 5.6 PLK基因在家蚕中的表达分析 | 第40-42页 |
| 第6章 结论 | 第42-43页 |
| 6.1 家蚕PLK的原核表达 | 第42页 |
| 6.2 多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 6.3 家蚕PLK转录水平研究 | 第42页 |
| 6.4 家蚕PLK表达水平研究 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录A 中英文缩写与注释 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
| 成果清单 | 第50页 |
