| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一部分 七例隐性交界型大疱性表皮松解症患者基因突变研究 | 第10-15页 |
| 临床资料 | 第10-11页 |
| 知情同意 | 第11-12页 |
| 材料与方法 | 第12-13页 |
| 1 主要仪器 | 第12页 |
| 2 主要试剂 | 第12页 |
| 3 实验方法 | 第12-13页 |
| 3.1 提取基因组DNA | 第12页 |
| 3.2 引物合成及保存 | 第12-13页 |
| 3.3 PCR反应 | 第13页 |
| 3.4 PCR产物电泳 | 第13页 |
| 3.5 产物送测序 | 第13页 |
| 3.6 分析测序结果 | 第13页 |
| 结果 | 第13-15页 |
| 第二部分 体外实验检测LAMA3突变体蛋白对LOCs患者伤口愈合的影响 | 第15-24页 |
| 材料与方法 | 第15-22页 |
| 1 主要仪器 | 第15页 |
| 2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 3 质粒的构建 | 第16-18页 |
| 3.1 载体准备 | 第16页 |
| 3.2 引物设计 | 第16页 |
| 3.3 T4多聚核苷酸激酶对引物 5ˊ端进行磷酸化修饰 | 第16页 |
| 3.4 PCR反应 | 第16-17页 |
| 3.5 DPNI酶处理PCR产物消化甲基化模板 | 第17页 |
| 3.6 T4连接酶连接 | 第17页 |
| 3.7 转化 | 第17页 |
| 3.8 鉴定突变型质粒 | 第17-18页 |
| 4 稳转细胞系的筛选 | 第18-19页 |
| 4.1 筛选培养基配制 | 第18页 |
| 4.2 培养293细胞 | 第18页 |
| 4.3 最佳筛选浓度确定 | 第18页 |
| 4.4 筛稳转细胞系 | 第18-19页 |
| 5 原代成纤维细胞与稳转细胞混合培养 | 第19-20页 |
| 5.1 正常人皮肤成纤维细胞原代培养 | 第19页 |
| 5.2 混合培养 | 第19-20页 |
| 6 RNA的提取（Trizol法） | 第20页 |
| 7 Q-PCR | 第20-21页 |
| 8 Western Blot Analysis | 第21-22页 |
| 结果 | 第22-24页 |
| 第三部分 体外实验预测剪切位点突变对LAMB3基因剪接的影响 | 第24-33页 |
| 材料与方法 | 第24-29页 |
| 1 主要仪器 | 第24页 |
| 2 主要试剂 | 第24页 |
| 3 目的片段的分子克隆 | 第24-28页 |
| 3.1 质粒准备 | 第24-25页 |
| 3.2 设计引物 | 第25页 |
| 3.3 PCR反应 | 第25-26页 |
| 3.4 目的片段切胶回收 | 第26页 |
| 3.5 酶切与再纯化 | 第26-27页 |
| 3.6 目的片段与质粒载体连接 | 第27页 |
| 3.7 转化 | 第27页 |
| 3.8 表达质粒的大量扩增和提取 | 第27-28页 |
| 3.9 培养Hela细胞 | 第28页 |
| 4 重组质粒的转染 | 第28页 |
| 5 RNA提取（Trizol法） | 第28-29页 |
| 6 RT-PCR | 第29页 |
| 7 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 8 PCR产物测序 | 第29页 |
| 结果 | 第29-33页 |
| 讨论 | 第33-36页 |
| 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 综述 | 第39-47页 |
| 综述参考文献 | 第44-47页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第47-48页 |
| 缩略词表 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
