| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 棉大卷叶螟生物学习性与危害 | 第11-14页 |
| 1.1.1 棉大卷叶螟生物学习性 | 第11-12页 |
| 1.1.2 影响棉大卷叶螟种群数量的一些因素 | 第12-13页 |
| 1.1.3 防治对策 | 第13-14页 |
| 1.2 昆虫吐丝概况 | 第14-18页 |
| 1.2.1 丝对昆虫的作用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 丝对人类的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 丝的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 RNA干扰 | 第18-22页 |
| 1.3.1 RNAi的研究概况 | 第18-19页 |
| 1.3.2 siRNA在昆虫上的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 应用RNAi对昆虫的研究 | 第20-22页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 棉大卷叶螟丝素重链基因的克隆 | 第24-44页 |
| 2.1 供试材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 棉大卷叶螟虫源 | 第24页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3 cDNA第一链合成 | 第26-27页 |
| 2.4 棉大卷叶螟丝素重链基因中间片段的扩增 | 第27-30页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第27页 |
| 2.4.2 丝素重链基因中间片段的扩增 | 第27页 |
| 2.4.3 目的基因片段产物的回收与纯化 | 第27-28页 |
| 2.4.4 目的基因产物的连接 | 第28页 |
| 2.4.5 连接产物的转化 | 第28-29页 |
| 2.4.6 单菌落PCR检测 | 第29页 |
| 2.4.7 测序 | 第29-30页 |
| 2.4.8 序列分析 | 第30页 |
| 2.5 丝素重链基因的3'Race | 第30-32页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第30页 |
| 2.5.2 3'RACE的扩增 | 第30-32页 |
| 2.6 丝素重链基因的5'Race | 第32-35页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第32页 |
| 2.6.2 棉大卷叶螟总RNA中裸露的5'磷酸基团的去除 | 第32-33页 |
| 2.6.3 mRNA 5'帽子结构的去除 | 第33-34页 |
| 2.6.5 反转录 | 第34页 |
| 2.6.6 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.7 序列分析 | 第35-36页 |
| 2.8 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.8.1 丝素重链基因中间片段扩增结果 | 第36-37页 |
| 2.8.2 3'RACE扩增结果 | 第37页 |
| 2.8.3 5'RACE扩增结果 | 第37-38页 |
| 2.8.4 开放阅读框扩增结果 | 第38-39页 |
| 2.8.5 序列分析 | 第39-42页 |
| 2.9 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 棉大卷叶螟丝素重链链基因在不同发育阶段以及饲喂不同寄主后的表达分析 | 第44-52页 |
| 3.1 供试材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 棉大卷叶螟虫源 | 第44页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 3.2.1 不同发育阶段处理 | 第45页 |
| 3.2.2 不同寄主处理 | 第45页 |
| 3.2.3 不同处理样品的RNA提取 | 第45-46页 |
| 3.2.4 反转录 | 第46-47页 |
| 3.2.5 引物设计与合成 | 第47页 |
| 3.2.6 重链基因实时定量分析 | 第47-48页 |
| 3.2.7 数据处理 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 3.3.1 引物与内参基因的可靠性 | 第48-50页 |
| 3.3.2 棉大卷叶螟不同发育阶段丝素重链基因的相对表达量 | 第50-51页 |
| 3.3.3 棉大卷叶螟饲喂不同寄主后丝素重链基因的相对表达量 | 第51页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 棉大卷叶螟丝素重链基因的RNA干扰 | 第52-66页 |
| 4.1 供试材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 棉大卷叶螟虫源 | 第53页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 dsRNA表达载体的构建 | 第54-58页 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 | 第54页 |
| 4.2.2 目标基因片段的制备 | 第54-55页 |
| 4.2.3 连接与转化 | 第55页 |
| 4.2.4 提取质粒 | 第55-56页 |
| 4.2.5 酶切 | 第56页 |
| 4.2.6 连接 | 第56-57页 |
| 4.2.7 转化至HT115大肠杆菌 | 第57页 |
| 4.2.8 dsRNA在大肠杆菌中的表达 | 第57页 |
| 4.2.9 dsRNA检验 | 第57-58页 |
| 4.2.10 喂食表达dsRNA细菌液的试验方法 | 第58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-65页 |
| 4.3.1 dsRNA在大肠杆菌中的表达 | 第58-60页 |
| 4.3.2 饲喂菌液对棉大卷叶螟幼虫的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.3 棉大卷叶螟幼虫喂食不同浓度菌液后丝素重链基因相对表达量变化. | 第61-62页 |
| 4.3.4 不同虫龄棉大卷叶螟幼虫喂食菌液不同天数后丝素重链基因的相对表达量 | 第62-64页 |
| 4.3.5 喂食棉大卷叶螟幼虫菌液对卷叶螟生长发育的影响 | 第64-65页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
