| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 LM 的危害和致毒机理 | 第12-16页 |
| 1.1.1 LM 的生物学特征、传播及危害 | 第12-13页 |
| 1.1.2 LM 的致病过程及其主要毒力因子 | 第13-16页 |
| 1.2 母胎界面的细胞和细胞因子 | 第16-21页 |
| 1.2.1 母胎界面细胞成分及免疫生物学特性 | 第16-19页 |
| 1.2.2 母胎界面细胞因子网络平衡与流产 | 第19-21页 |
| 1.3 炎性体及其激活机制 | 第21-25页 |
| 1.3.1 炎性体的概念 | 第21-22页 |
| 1.3.2 炎性体的组成 | 第22-23页 |
| 1.3.3 炎性体的激活 | 第23页 |
| 1.3.4 LM 对炎性体的激活 | 第23-25页 |
| 2 实验一 LM 对小鼠胚胎存活率及胎盘相关因子表达的影响 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌株和实验动物 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 李斯特菌悬液的制备 | 第27页 |
| 2.2.2 动物处理 | 第27页 |
| 2.2.3 试验取样 | 第27-28页 |
| 2.2.4 细胞因子含量的测定 | 第28页 |
| 2.2.5 胎盘组织 caspase1 的检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 统计处理 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 LM 对胚胎存活率的影响 | 第30页 |
| 2.3.2 LM 对妊娠小鼠胎盘 Th1/Th2 型细胞因子的影响 | 第30-32页 |
| 2.3.3 LM 对妊娠小鼠胎盘和血清中 IL-1β的影响 | 第32页 |
| 2.3.4 LM 感染对妊娠小鼠胎盘 caspase1 的影响 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-36页 |
| 2.4.1 LM 对小鼠胚胎存活率的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.2 LM 对妊娠小鼠胎盘主要 Thl/Th2 型细胞因子的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.3 LM 对妊娠小鼠血清和胎盘中 IL-1β含量的影响 | 第35页 |
| 2.4.4 LM 对妊娠小鼠胎盘炎性体的激活 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 3 实验二 重组 LLO 在大肠杆菌中分泌表达及活性分析 | 第37-50页 |
| 3.1 试验材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 菌株、载体和细胞 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 培养基及溶液的配制 | 第37-39页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.2.1 LLO 基因的 PCR 扩增 | 第39-40页 |
| 3.2.2 LLO 基因重组载体 pET-20b-LLO 的构建 | 第40-44页 |
| 3.2.3 重组质粒 pET-20b-LLO 在原核细胞中的表达及活性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 结果 | 第45-48页 |
| 3.3.1 LLO 基因的扩增及其表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 重组 LLO 在大肠杆菌中的分泌表达 | 第46-47页 |
| 3.3.3 重组 LLO 的活性分析 | 第47页 |
| 3.3.4 不同诱导条件对重组 LLO 表达量的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-50页 |
| 4 实验三 LM 对巨噬细胞炎性体的激活机制 | 第50-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.1.1 菌株及细胞系 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 试剂的配制 | 第50-51页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 细胞的复苏、培养和冻存 | 第52页 |
| 4.2.2 LM 对巨噬细胞的感染 | 第52-53页 |
| 4.2.3 IL-1β浓度的测定 | 第53页 |
| 4.2.4 Western-Blot 检测 caspase1 的表达 | 第53页 |
| 4.2.5 RT-PCR 检测细胞因子和趋化因子 mRNA 水平 | 第53-54页 |
| 4.2.6 细胞凋亡的检测 | 第54页 |
| 4.2.7 LDH 释放的测定 | 第54页 |
| 4.2.8 激光共聚焦显微镜染色 | 第54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-62页 |
| 4.3.1 LM 促进了巨噬细胞 IL-1β的表达 | 第54-55页 |
| 4.3.2 LM 诱导了巨噬细胞炎性体的激活 | 第55-56页 |
| 4.3.3 LM 诱导了巨噬细胞 caspase1 依赖的死亡 | 第56-57页 |
| 4.3.4 LM 激活巨噬细胞炎性体与 LLO 有关 | 第57-58页 |
| 4.3.5 细胞内的 LLO 激活巨噬细胞炎性体的机制 | 第58-60页 |
| 4.3.6 细胞外 LLO 激活巨噬细胞炎性体的机制 | 第60-61页 |
| 4.3.7 LM 通过 LLO 激活巨噬细胞 NLRP3 炎性体 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 4.4.1 LM 可诱导巨噬细胞炎性体的激活和促炎性细胞因子的表达 | 第62页 |
| 4.4.2 LM 诱导了巨噬细胞 caspase1 依赖的凋亡和死亡 | 第62-63页 |
| 4.4.3 LM 激活巨噬细胞炎性体与 LLO 有关 | 第63页 |
| 4.4.4 LLO 对炎性体激活的机制 | 第63-64页 |
| 4.4.5 LM 通过 LLO 激活巨噬细胞 NLRP3 炎性体 | 第64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 5 实验四 LM 感染的巨噬细胞对滋养层细胞的调节作用 | 第65-71页 |
| 5.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 5.1.1 菌株及细胞系 | 第65页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 5.1.3 试剂的配制 | 第65-66页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第66页 |
| 5.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 5.2.1 LM 对巨噬细胞的感染 | 第66页 |
| 5.2.2 滋养层细胞侵袭实验 | 第66-67页 |
| 5.2.3 RT-PCR 检测细胞因子和趋化因子 mRNA 水平 | 第67页 |
| 5.3 实验结果 | 第67-70页 |
| 5.3.1 感染 LM 的巨噬细胞可调节滋养层细胞的侵袭 | 第67-68页 |
| 5.3.2 感染 LM 的巨噬细胞可调节滋养层细胞细胞因子的表达 | 第68-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70页 |
| 5.5 小结 | 第70-71页 |
| 6 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-85页 |
| 在读期间发表的论文 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
