摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-9页 |
第一章 文献综述 | 第9-28页 |
1 虹彩病毒 | 第9-13页 |
·虹彩病毒概况 | 第9-10页 |
·虹彩病毒分类 | 第10-11页 |
·虹彩病毒的结构 | 第11页 |
·肿大细胞病毒属 | 第11-12页 |
·ISKNV 研究进展 | 第12-13页 |
2 窖蛋白家族的研究进展 | 第13-20页 |
·窖蛋白(caveolin) | 第13-14页 |
·Caveolin 的结构 | 第14-16页 |
·Caveolin 的功能 | 第16-19页 |
·Caveolin-1 在病毒感染过程中的作用 | 第19-20页 |
3 病毒与宿主相互作用的研究方法 | 第20-23页 |
·免疫共沉淀 | 第21页 |
·酵母双杂交技术 | 第21-22页 |
·病毒铺覆蛋白印迹技术 | 第22页 |
·GST 亲和层析和 GST Pull-down 方法 | 第22页 |
·荧光共振能量转移技术(Fluorescence resonance energy transfer,FRET) | 第22-23页 |
4 细胞骨架与病毒的关系 | 第23-27页 |
·细胞骨架的组成 | 第23-25页 |
·细胞骨架在病毒感染过程中的作用 | 第25-27页 |
5 本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
第二章 ISKNV 中与 MCAV-1 相互作用蛋白的筛选 | 第28-58页 |
1 引言 | 第28页 |
2 实验材料 | 第28-35页 |
3 实验方法 | 第35-48页 |
4 结果 | 第48-55页 |
·目的基因的扩增 | 第48-49页 |
·重组质粒的构建和鉴定 | 第49页 |
·重组质粒的表达鉴定 | 第49页 |
·重组质粒与 mCav-1 免疫共沉淀分析 | 第49-50页 |
·MCP 与 mCav-1 蛋白的在转染细胞中的共定位分析 | 第50-51页 |
·Myc-MCP 与 Flag-mCav-1 的免疫共沉淀分析 | 第51-52页 |
·pGEX-4T-1-MCP 重组质粒的构建及原核表达 | 第52-53页 |
·Pull-down 证明 MCP 与 mCav-1 之间的相互作用 | 第53-55页 |
5 讨论 | 第55-56页 |
6 小结 | 第56-58页 |
第三章 MCP 与 MCAV-1 相互作用区域分析及其在 ISKNV 侵染过程中作用 | 第58-80页 |
1 引言 | 第58页 |
2 实验方法 | 第58-67页 |
3 结果 | 第67-76页 |
·mCav-1 突变体真核质粒的构建 | 第67-68页 |
·Western-blot 检验 mCav-1 突变体真核表达质粒的表达 | 第68页 |
·MCP 与 mCav-1 相互作用区域的确定 | 第68-70页 |
·ISKNV 感染感染早期,MFF-1 细胞中 MCP 与 mCav-1 的共迁移 | 第70-72页 |
·ISKNV 感染早期 mCav-1 与 MCP 在 MFF-1 细胞中共定位 | 第72-73页 |
·抑制 mCav-1 蛋白的表达阻碍 ISKNV 的入侵 | 第73-75页 |
·稳定细胞系的筛选和感染 | 第75-76页 |
4 讨论 | 第76-78页 |
5 小结 | 第78-80页 |
第四章 细胞骨架蛋白在 ISKNV 侵染中的作用 | 第80-98页 |
1 引言 | 第80页 |
2 实验方法 | 第80-86页 |
3 结果 | 第86-95页 |
·Actin 和 microtubules 解聚药物对 MFF-1 细胞骨架的影响 | 第86页 |
·Actin 解聚药物对 ISKNV 感染的影响 | 第86-89页 |
·解聚 actin 影响 ISKNV 对 MFF-1 细胞的入侵 | 第89-91页 |
·Actin 和 microtubules 解聚药物对 ISKNV 晚期阶段的影响 | 第91-93页 |
·ISKNV 的 MCP 与 MFF-1 细胞的 actin 蛋白之间存在相互作用 | 第93-94页 |
·Triton X-100 与 subtilisin 处理实验 | 第94-95页 |
4 讨论 | 第95-97页 |
5 小结 | 第97-98页 |
全文总结 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-110页 |
附录 博士期间发表及待发表论文 | 第110-111页 |
致谢 | 第111-112页 |