| 摘要 | 第4-6页 |
| SUMMARY | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 CD47分子的基本特性 | 第9-10页 |
| 1.1 CD47的发现 | 第9-10页 |
| 1.2 CD47结构与分布 | 第10页 |
| 2 CD47分子与整合素、TSP-1 及SIRPα 之间的相互作用 | 第10-13页 |
| 2.1 CD47与整合素分子 | 第10-11页 |
| 2.2 CD47与TSP-1 | 第11页 |
| 2.3 CD47与SIRPα | 第11-13页 |
| 3 CD47在移植领域中的研究 | 第13-15页 |
| 3.1 CD47在移植中的研究 | 第13-14页 |
| 3.2 CD47与免疫耐受 | 第14-15页 |
| 4 研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二部分 广泛性表达hCD47转基因克隆猪制备 | 第16-35页 |
| 1 实验材料 | 第16-20页 |
| 1.1 动物性材料 | 第16页 |
| 1.2 主要试剂及实验耗材 | 第16-17页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第18-20页 |
| 2 方法 | 第20-27页 |
| 2.1 表达载体pCAGGS-hCD47-Neo的构建及鉴定 | 第20-22页 |
| 2.1.1 表达载体pCAGGS-hCD47-Neo的构建 | 第20-21页 |
| 2.1.2 载体pCAGGS-hCD47-Neo的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2 阳性克隆点细胞转染、筛选及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.1 供体细胞的转染 | 第22页 |
| 2.2.2 阳性克隆点细胞筛选 | 第22页 |
| 2.2.3 阳性细胞鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3 转基因克隆胚胎的重构及胚胎移植 | 第23-24页 |
| 2.3.1 转基因胚胎的重构 | 第23页 |
| 2.3.2 胚胎移植和妊娠检测 | 第23-24页 |
| 2.4 转hCD47基因仔猪鉴定 | 第24-26页 |
| 2.4.1 DNA整合鉴定 | 第24页 |
| 2.4.2 qRT-PCR分析 | 第24-25页 |
| 2.4.3 Western Blot检测 | 第25页 |
| 2.4.4 免疫组化检测 | 第25-26页 |
| 2.5 仔猪血液生理指标检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-34页 |
| 3.1 pCAGGS-hCD47-Neo载体酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 阳性克隆点细胞RT-PCR鉴定 | 第28页 |
| 3.3 阳性克隆点细胞GGTA1基因流式分析 | 第28-29页 |
| 3.4 转基因克隆胚胎移植后的体内发育 | 第29-30页 |
| 3.5 仔猪DNA整合鉴定 | 第30页 |
| 3.6 qRT-PCR检测各组织hCD47基因的表达 | 第30-31页 |
| 3.7 Western Blot及免疫组化检测 | 第31-32页 |
| 3.8 仔猪血液生理指标检测 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第三部分 转hCD47基因猪的功能研究 | 第35-44页 |
| 1 实验材料 | 第35-37页 |
| 1.1 动物性材料 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂及实验耗材 | 第35-36页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| 2.1 转基因克隆猪pMSCS细胞的分离 | 第37页 |
| 2.2 pMSCS细胞表面分子标志鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3 pMSCS及PBMC细胞hCD47的流式检测 | 第38页 |
| 2.4 猪PBMC细胞剩余量检测 | 第38-39页 |
| 2.4.1 猪PBMC细胞分离 | 第38页 |
| 2.4.2 CFSE标记PBMC细胞 | 第38-39页 |
| 2.4.3 THP-1 细胞诱导分化 | 第39页 |
| 2.4.4 人巨噬细胞与猪PBMC体外共孵育 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.1 pMSCS细胞的体外培养 | 第39-40页 |
| 3.2 pMSCS细胞表面标志测定 | 第40-41页 |
| 3.3 转基因克隆猪pMSCS及PBMC细胞上hCD47的流式分析 | 第41-42页 |
| 3.4 猪PBMC细胞剩余量检测结果及分析 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四部分 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 导师简介 | 第53-54页 |
