| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 一 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 植物细胞壁研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第15页 |
| 1.1.2 半纤维素 | 第15页 |
| 1.1.3 果胶 | 第15-16页 |
| 1.1.4 木质素 | 第16页 |
| 1.2 植物细胞壁多糖蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 阿拉伯半乳糖蛋白AGP | 第18-21页 |
| 1.3.1 AGP的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2 AGP的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.3 AGP的生物合成 | 第20-21页 |
| 1.4 脯氨酸羟化酶P4Hs | 第21-24页 |
| 1.5 立题依据及本研究的重要意义 | 第24-25页 |
| 二、实验材料及试剂药品 | 第25-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2 实验菌种及载体 | 第25页 |
| 2.3 实验所需的工具酶 | 第25页 |
| 2.4 所用的化学试剂 | 第25页 |
| 2.5 实验所用的储存液 | 第25-26页 |
| 2.6 常用缓冲液及提取buffer的配制 | 第26页 |
| 2.7 β-Yariv试剂的制备 | 第26-27页 |
| 三、实验方法 | 第27-32页 |
| 3.1 棉花GhP4Hs的组织表达分析 | 第27页 |
| 3.2 拟南芥的培养及转化 | 第27-28页 |
| 3.2.1 拟南芥的培养 | 第27页 |
| 3.2.2 拟南芥的转化 | 第27-28页 |
| 3.3 拟南芥阳性苗的鉴定 | 第28页 |
| 3.4 拟南芥表达量的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.4.1 过量表达转基因拟南芥RNA的提取 | 第28页 |
| 3.4.2 RNA的消化及逆转录 | 第28-29页 |
| 3.4.3 过量表达转基因拟南芥表达量分析 | 第29页 |
| 3.5 拟南芥AGP提取及分析 | 第29-32页 |
| 3.5.1 拟南芥AGP的初步提取 | 第29-30页 |
| 3.5.2 拟南芥AGP的定量分析 | 第30页 |
| 3.5.3 拟南芥AGP的Dot Blot分析 | 第30-31页 |
| 3.5.4 拟南芥AGP的Western Blot分析 | 第31-32页 |
| 四、实验结果与分析 | 第32-49页 |
| 4.1 棉花P4Hs的分离与克隆 | 第32-34页 |
| 4.1.1 脯氨酸羟化酶参与纤维起始与伸长 | 第32-33页 |
| 4.1.2 三个GhP4Hs系统进化分析 | 第33页 |
| 4.1.3 三个GhP4Hs基因的组织表达分析 | 第33-34页 |
| 4.2 p4h5突变体的鉴定及表型分析 | 第34-35页 |
| 4.3 p4h5突变体的生化分析 | 第35-36页 |
| 4.4 三个GhP4Hs回补拟南芥p4h5突变体 | 第36-39页 |
| 4.4.1 三个GhP4Hs回补拟南芥p4h5突变体阳性苗的获得 | 第36-37页 |
| 4.4.2 棉花GhP4H1回补拟南芥p4h5突变体表达分析 | 第37-38页 |
| 4.4.3 棉花GhP4H1回补拟南芥p4h5突变体表型分析 | 第38-39页 |
| 4.5 棉花GhP4H1过量表达转基因拟南芥分析 | 第39-44页 |
| 4.5.1 棉花GhP4H1过量表达转基因拟南芥表达分析 | 第39-40页 |
| 4.5.2 棉花GhP4H1过量表达转基因拟南芥表型分析 | 第40-43页 |
| 4.5.3 GhP4H1过量表达转基因拟南芥生化分析 | 第43-44页 |
| 4.6 GhP4H1和GhP4H2过量表达转基因棉花株系的获得及其阳性鉴定 | 第44-45页 |
| 4.6.1 GhP4Hs过量表达载体棉花遗传转化 | 第44-45页 |
| 4.6.2 GhP4Hs过量表达载体转基因棉花的鉴定 | 第45页 |
| 4.7 GhP4H1-RNAi和GhP4H2-RNAi转基因棉花株系的获得及其阳性鉴定 | 第45-47页 |
| 4.8 GhP4H2-OE和GhP4H2-RNAi转基因棉花的表型分析 | 第47-49页 |
| 五、讨论 | 第49-51页 |
| 5.1 棉花GhP4Hs基因可能参与棉纤维的起始和伸长 | 第49-50页 |
| 5.2 GhP4Hs在拟南芥中功能的发挥可能依赖于蔗糖 | 第50页 |
| 5.3 GhP4Hs参与棉纤维的伸长可能通过参与AGPs的合成 | 第50页 |
| 5.4 富含羟脯氨酸的糖蛋白改变有可能会引起植物细胞壁结构的改变 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
