| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15页 |
| 1 马铃薯病毒鉴定与检测方法的研究背景、问题与思考 | 第19-41页 |
| 1．1 马铃薯主要病毒简介 | 第19-23页 |
| 1．1．1 马铃薯Y病毒和马铃薯A病毒 | 第19-21页 |
| 1．1．2 马铃薯X病毒 | 第21-22页 |
| 1．1．3 马铃薯卷叶病毒 | 第22页 |
| 1．1．4 马铃薯S病毒和马铃薯M病毒 | 第22-23页 |
| 1．2 以抗体为基础的免疫学检测方法 | 第23-30页 |
| 1．2．1 酶联免疫吸附法测定 | 第23-25页 |
| 1．2．1．1 基本原理 | 第23-24页 |
| 1．2．1．2 双抗体夹心-酶联免疫吸附法 | 第24页 |
| 1．2．1．3 硝酸纤维素膜-酶联免疫吸附法 | 第24-25页 |
| 1．2．1．4 快速酶联免疫吸附法 | 第25页 |
| 1．2．2 其他以抗体为基础的免疫学方法 | 第25-26页 |
| 1．2．2．1 直接组织免疫测定 | 第25页 |
| 1．2．2．2 免疫电镜技术 | 第25-26页 |
| 1．2．2．3 反向被动血细胞凝集反应 | 第26页 |
| 1．2．2．4 流式细胞仪法 | 第26页 |
| 1．2．2．5 IgG指示试纸法 | 第26页 |
| 1．2．3 病毒抗血清的制备 | 第26-30页 |
| 1．2．3．1 以提纯病毒粒体为抗原制备抗血清 | 第26-27页 |
| 1．2．3．2 以病毒外壳蛋白基因体外表达产物为抗原制备抗血清 | 第27页 |
| 1．2．3．3 病毒DNA介导的抗血清的制备 | 第27-29页 |
| 1．2．3．4 病毒单链抗体的制备 | 第29-30页 |
| 1．3 马铃薯病毒分子检测技术 | 第30-38页 |
| 1．3．1 RT-PCR检测技术 | 第30-33页 |
| 1．3．1．1 常规RT-PCR检测技术 | 第30-31页 |
| 1．3．1．2 多元-RT-PCR检测技术 | 第31-32页 |
| 1．3．1．3 荧光竞争-RT-PCR检测技术 | 第32页 |
| 1．3．1．4 免疫捕捉-RT-PCR检测技术 | 第32-33页 |
| 1．3．2 指示分子-核酸序列扩增检测技术 | 第33-35页 |
| 1．3．3 核酸杂交检测技术 | 第35-38页 |
| 1．3．3．1 核酸斑点杂交技术 | 第36-37页 |
| 1．3．3．2 PCR微量板杂交检测技术 | 第37-38页 |
| 1．4 血清学与分子生物学技术的比较 | 第38-39页 |
| 1．4．1 对标本的要求 | 第38页 |
| 1．4．2 敏感性和特异性 | 第38页 |
| 1．4．3 病毒定量检测 | 第38页 |
| 1．4．4 病毒基因分型 | 第38-39页 |
| 1．4．5 操作的复杂性、自动化程度 | 第39页 |
| 1．4．6 检测费用 | 第39页 |
| 1．5 讨论与展望 | 第39-41页 |
| 2 试剂与常规方法 | 第41-56页 |
| 2．1 材料 | 第41-42页 |
| 2．1．1 菌株 | 第41页 |
| 2．1．2 质粒 | 第41页 |
| 2．1．3 引物 | 第41-42页 |
| 2．1．4 试剂及酶类 | 第42页 |
| 2．2 方法 | 第42-56页 |
| 2．2．1 电子显微镜观察 | 第42页 |
| 2．2．2 血清学检测 | 第42-43页 |
| 2．2．2．1 抗体夹心-酶联免疫吸附法 | 第42-43页 |
| 2．2．2．2 间接酶联免疫吸附法 | 第43页 |
| 2．2．2．3 快速酶联免疫吸附法 | 第43页 |
| 2．2．3 植物总RNA提取 | 第43-44页 |
| 2．2．3．1 异硫氰酸胍法 | 第43-44页 |
| 2．2．3．2 TRIzol法 | 第44页 |
| 2．2．3．3 试剂盒法 | 第44页 |
| 2．2．4 反转录-聚合酶链式反应 | 第44-46页 |
| 2．2．4．1 常规RT-PCR | 第44页 |
| 2．2．4．1．1 反转录 | 第44页 |
| 2．2．4．1．2 聚合酶链式反应 | 第44页 |
| 2．2．4．2 一步RT-PCR检测技术 | 第44-45页 |
| 2．2．4．3 免疫捕捉-RT-PCR检测技术 | 第45-46页 |
| 2．2．4．3．1 病毒粒体的免疫捕捉 | 第45-46页 |
| 2．2．4．3．2 RT-PCR扩增 | 第46页 |
| 2．2．5 目的基因转化大肠杆菌 | 第46-50页 |
| 2．2．5．1 DNA片段的切胶纯化 | 第46页 |
| 2．2．5．2 与载体质粒的连接 | 第46-48页 |
| 2．2．5．2．1 与pGEM-T easy载体连接 | 第46-47页 |
| 2．2．5．2．2 与原核表达载体pGEX2T连接 | 第47-48页 |
| 2．2．5．3 氯化钙法转化 | 第48-50页 |
| 2．2．5．3．1 感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 2．2．5．3．2 转化 | 第48页 |
| 2．2．5．3．3 碱裂解法小量提取质粒 | 第48-49页 |
| 2．2．5．3．4 重组克隆的酶切鉴定 | 第49页 |
| 2．2．5．3．5 重组克隆的PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 2．2．6 序列测定与分析 | 第50页 |
| 2．2．6．1 DNA序列测定 | 第50页 |
| 2．2．6．2 DNA序列分析 | 第50页 |
| 2．2．7 病毒基因在大肠杆菌中的表达 | 第50-52页 |
| 2．2．7．1 PVS CP基因原核表达载体的构建 | 第50页 |
| 2．2．7．2 PVX、PVA CP、PVY P1基因原核表达载体的构建 | 第50页 |
| 2．2．7．3 融合蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| 2．2．7．4 蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51页 |
| 2．2．7．5 Western blot鉴定 | 第51-52页 |
| 2．2．8 融合蛋白特异性抗血清的制备及应用 | 第52页 |
| 2．2．8．1 融合蛋白抗血清的制备 | 第52页 |
| 2．2．8．2 抗血清效价测定 | 第52页 |
| 2．2．8．3 间接ELISA检测方法的建立 | 第52页 |
| 2．2．9 DNA探针的制备及应用 | 第52-55页 |
| 2．2．9．1 地高辛标记的DNA探针制备 | 第52-53页 |
| 2．2．9．2 RNA点杂交 | 第53-54页 |
| 2．2．9．2．1 常规方法 | 第53-54页 |
| 2．2．9．2．2 改进方法 | 第54页 |
| 2．2．9．3 PCR微量板杂交 | 第54-55页 |
| 2．2．10 马铃薯病毒检测试剂盒的研制 | 第55页 |
| 2．2．10．1 马铃薯病毒一步RT-PCR检测试剂盒的组装 | 第55页 |
| 2．2．10．2 马铃薯病毒核酸斑点杂交检测试剂盒的组装 | 第55页 |
| 2．2．10．3 马铃薯病毒ELISA检测试剂盒的组装 | 第55页 |
| 2．2．11 福建马铃薯病毒病发生情况调查 | 第55-56页 |
| 2．2．11．1 病毒样品的采集 | 第55页 |
| 2．2．11．2 病毒样品的检测 | 第55-56页 |
| 3 马铃薯S病毒的鉴定及检测技术 | 第56-67页 |
| 3．1 PVS毒源的检测鉴定与分离纯化 | 第56-57页 |
| 3．1．1 样品的采集 | 第56页 |
| 3．1．2 样品的检测 | 第56-57页 |
| 3．1．2．1 血清学检测 | 第56-57页 |
| 3．1．2．2 电子显微镜观察 | 第57页 |
| 3．1．2．3 PVS的生物学鉴定 | 第57页 |
| 3．2 PVS CP基因的克隆与序列差异分析 | 第57-60页 |
| 3．2．1 PVS CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第57页 |
| 3．2．2 PVS CP基因序列测定及与分析 | 第57-58页 |
| 3．2．3 PVS CP氨基酸序列差异性比较 | 第58-60页 |
| 3．3 PVS CP基因的原核表达及抗血清的制备 | 第60-64页 |
| 3．3．1 PVS CP基因融合蛋白原核表达载体的构建 | 第60页 |
| 3．3．2 融合蛋白SDS-PAGE分离鉴定 | 第60-62页 |
| 3．3．3 Western blot鉴定 | 第62-63页 |
| 3．3．4 GST-SCP蛋白抗血清的制备与效价测定 | 第63页 |
| 3．3．5 间接ELISA检测方法的建立 | 第63页 |
| 3．3．5．1 抗血清的适宜工作浓度 | 第63页 |
| 3．3．5．2 检测灵敏度 | 第63页 |
| 3．3．6 快速ELISA检测方法的建立 | 第63-64页 |
| 3．4 PVS分子检测技术的建立 | 第64-67页 |
| 3．4．1 PVS RT-PCR检测技术 | 第64-65页 |
| 3．4．1．1 常规RT-PCR检测技 | 第64页 |
| 3．4．1．2 一步RT-PCR检测技术 | 第64-65页 |
| 3．4．1．3 IC-RT-PCR检测技术 | 第65页 |
| 3．4．2 核酸杂交检测技术 | 第65-67页 |
| 3．4．2．1 NASH检测技术 | 第65页 |
| 3．4．2．2 PCR-微量板检测技术 | 第65-67页 |
| 4 马铃薯X病毒的鉴定及检测技术 | 第67-78页 |
| 4．1 毒源的获得 | 第67-68页 |
| 4．1．1 样品的采集 | 第67页 |
| 4．1．2 样品的检测 | 第67-68页 |
| 4．1．2．1 血清学检测 | 第67-68页 |
| 4．1．2．2 电子显微镜观察 | 第68页 |
| 4．1．2．3 PVX的生物学鉴定 | 第68页 |
| 4．2 PVX CP基因的克隆与序列分析 | 第68-72页 |
| 4．2．1 PVX CP基因的扩增与克隆 | 第68-69页 |
| 4．2．2 PVX CP基因序列测定与分析 | 第69-70页 |
| 4．2．3 PVX不同分离物间CP基因核苷酸及氨基酸序列差异分析 | 第70-72页 |
| 4．3 PVX CP基因的原核表达及特异性抗血清的制备 | 第72-75页 |
| 4．3．1 原核表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 4．3．2 融合蛋白的诱导表达 | 第73-74页 |
| 4．3．3 免疫学鉴定 | 第74-75页 |
| 4．3．4 GST-XCP蛋白抗血清的制备与效价测定 | 第75页 |
| 4．3．5 间接ELISA检测方法的建立 | 第75页 |
| 4．3．6 快速ELISA检测技术的建立 | 第75页 |
| 4．4 PVX分子检测技术的建立 | 第75-78页 |
| 4．4．1 常规RT-PCR检测技术 | 第75-76页 |
| 4．4．2 RT-PCR检测技术的改进 | 第76-77页 |
| 4．4．3 核酸杂交检测 | 第77-78页 |
| 4．4．3．1 NASH检测技术 | 第77页 |
| 4．4．3．2 PCR-微量板检测技术 | 第77-78页 |
| 5 马铃薯Y病毒的检测与鉴定 | 第78-89页 |
| 5．1 毒源的获得 | 第78-79页 |
| 5．2 PVY的提纯及电镜观察 | 第79页 |
| 5．3 PVY P1基因的克隆与序列分析 | 第79-83页 |
| 5．3．1 PVY P1基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第79-80页 |
| 5．3．2 PVY P1基因序列测定及同源性比较 | 第80-83页 |
| 5．3．2．1 PVY P1基因的序列测定及分析 | 第80页 |
| 5．3．2．2 PVY不同分离物P1氨基酸序列差异性分析 | 第80-83页 |
| 5．4 PVY P1基因的原核表达 | 第83-85页 |
| 5．4．1 PVY P1基因融合蛋白原核表达载体的构建 | 第83-84页 |
| 5．4．2 融合蛋白SDS-PAGE分离鉴定 | 第84-85页 |
| 5．5 PVY RT-PCR检测技术 | 第85-87页 |
| 5．5．1 常规RT-PCR检测技术的建立 | 第85页 |
| 5．5．2 一步RT-PCR检测技术 | 第85-86页 |
| 5．5．3 IC-RT-PCR检测技术 | 第86-87页 |
| 5．6 PVY核酸斑点杂交检测技术 | 第87-89页 |
| 5．6．1 PVY核酸斑点杂交检测 | 第87-88页 |
| 5．6．2 RT-PCR-微量板杂交检测 | 第88-89页 |
| 6 马铃薯A病毒的鉴定及检测 | 第89-98页 |
| 6．1 PVA毒源的检测鉴定与分离纯化 | 第89-90页 |
| 6．1．1 样品的采集 | 第89页 |
| 6．1．2 样品的检测 | 第89-90页 |
| 6．1．2．1 电子显微镜观察 | 第89页 |
| 6．1．2．2 生物学鉴定 | 第89-90页 |
| 6．2 PVA CP基因的克隆与序列差异分析 | 第90-94页 |
| 6．2．1 PVA CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第90页 |
| 6．2．2 PVA CP基因序列测定及同源性比较 | 第90-91页 |
| 6．2．3 PVA不同分离物CP氨基酸差异性分析 | 第91-94页 |
| 6．3 PVA CP基因的原核表达 | 第94-96页 |
| 6．3．1 PVA CP基因融合蛋白原核表达载体的构建 | 第94-95页 |
| 6．3．2 融合蛋白SDS-PAGE分离鉴定 | 第95-96页 |
| 6．4 PYA RT-PCR分子检测技术 | 第96-97页 |
| 6．4．1 常规RT-PCR检测技术 | 第96页 |
| 6．4．2 一步RT-PCR检测技术 | 第96-97页 |
| 6．5 核酸杂交检测技术 | 第97-98页 |
| 6．5．1 核酸斑点杂交检测 | 第97页 |
| 6．5．2 PCR-微量板检测技术 | 第97-98页 |
| 7 马铃薯卷叶病毒的鉴定与检测 | 第98-103页 |
| 7．1 PLRV毒源的获得 | 第98页 |
| 7．2 PLRV CP基因的克隆与序列差异分析 | 第98-101页 |
| 7．2．1 PLRV CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第98-99页 |
| 7．2．2 PLRV CP基因序列测定及同源性比较 | 第99页 |
| 7．2．3 PLRV不同分离物CP氨基酸序列差异性分析 | 第99-101页 |
| 7．3 PLRVRT-PCR检测技术 | 第101-103页 |
| 7．3．1 常规RT-PCR检测技术的建立 | 第101-102页 |
| 7．3．2 一步RT-PCR检测技术 | 第102页 |
| 7．3．3 IC-RT-PCR检测技术 | 第102-103页 |
| 8 马铃薯病毒检测试剂盒的研制 | 第103-107页 |
| 8．1 一步RT-PCR检测试剂盒 | 第103-104页 |
| 8．1．1 试剂组成及配方 | 第103页 |
| 8．1．2 操作方法 | 第103-104页 |
| 8．2 核酸斑点杂交检测试剂盒 | 第104-105页 |
| 8．2．1 主要试剂配方 | 第104页 |
| 8．2．2 操作方法 | 第104-105页 |
| 8．3 ELISA检测试剂盒 | 第105-107页 |
| 8．3．1 主要试剂配方 | 第105-106页 |
| 8．3．2 操作方法 | 第106-107页 |
| 9 福建省马铃薯病毒发病情况调查 | 第107-113页 |
| 9．1 福建省马铃薯病毒病田间症状 | 第107-110页 |
| 9．1．1 花叶 | 第107-108页 |
| 9．1．2 卷叶 | 第108-109页 |
| 9．1．3 矮化 | 第109页 |
| 9．1．4 束顶 | 第109-110页 |
| 9．2 福建省马铃薯病毒的检测鉴定 | 第110页 |
| 9．3 福建省马铃薯病毒病发生情况分析 | 第110-112页 |
| 9．4 福建省马铃薯病毒病发生原因的初步分析 | 第112-113页 |
| 9．4．1 种薯来源与马铃薯病毒病发生关系 | 第112页 |
| 9．4．2 留种方式与马铃薯病毒病发生关系 | 第112-113页 |
| 讨论 | 第113-118页 |
| 结语 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 附录1 缩写词和英汉对照 | 第129-131页 |
| 附录2： 本研究使用的主要试剂与溶液的配制 | 第131-136页 |
| 附录3： 攻读博士期间发表（投稿）的论文 | 第136页 |
