| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 低聚半乳糖 | 第14-19页 |
| 1.2.1 益生元 | 第14-15页 |
| 1.2.2 低聚半乳糖简介 | 第15-17页 |
| 1.2.3 低聚半乳糖的酶法合成 | 第17-19页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶的改造 | 第19-20页 |
| 1.4 本文研究意义与设计思路 | 第20-22页 |
| 第2章 β-葡萄糖苷酶TN0602突变体的构建与表达 | 第22-34页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.3.2 全质粒PCR及产物纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.3 PCR产物的磷酸化与连接 | 第25-26页 |
| 2.3.4 重组质粒的转化及鉴定 | 第26页 |
| 2.3.5 突变体的诱导表达 | 第26页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第26-33页 |
| 2.4.1 突变位点的选择 | 第26-27页 |
| 2.4.2 目的基因的PCR | 第27-28页 |
| 2.4.3 定点突变重组质粒的鉴定 | 第28-31页 |
| 2.4.4 突变体的诱导表达 | 第31-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第3章 β-葡萄糖苷酶TN0602突变体在合成低聚半乳糖中的研究 | 第34-46页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第34页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 低聚半乳糖的合成 | 第34-35页 |
| 3.3.2 反应产物中各组分含量的测定 | 第35页 |
| 3.3.3 突变体合成低聚半乳糖反应的优化 | 第35页 |
| 3.3.4 低聚半乳糖的纯化 | 第35-36页 |
| 3.3.5 低聚半乳糖的分子量及结构鉴定 | 第36页 |
| 3.3.6 TN0602突变体的分子对接分析 | 第36页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 3.4.1 低聚半乳糖的合成 | 第36-37页 |
| 3.4.2 突变体催化低聚半乳糖的合成 | 第37-39页 |
| 3.4.3 突变体合成低聚半乳糖反应的优化 | 第39-41页 |
| 3.4.4 突变体F414S合成低聚半乳糖的时间进程 | 第41-42页 |
| 3.4.5 突变体对低聚半乳糖合成的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.6 TN0602突变体的分子对接分析 | 第43-45页 |
| 3.4.7 低聚半乳糖的分子量及结构鉴定 | 第45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 第4章 突变体F414S的纯化与酶学性质表征 | 第46-55页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第46页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-49页 |
| 4.3.1 突变体F414S的纯化 | 第46-47页 |
| 4.3.2 蛋白浓度测定与酶活力测定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 突变体F414S动力学常数的测定 | 第48页 |
| 4.3.4 突变体F414S最适反应温度的测定 | 第48页 |
| 4.3.5 突变体F414S最适反应pH的测定 | 第48-49页 |
| 4.3.6 突变体F414S稳定性的测定 | 第49页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第49-53页 |
| 4.4.1 突变体F414S的纯化 | 第49-50页 |
| 4.4.2 突变体F414S动力学常数的测定 | 第50页 |
| 4.4.3 突变体F414S最适反应温度的测定 | 第50-51页 |
| 4.4.4 突变体F414S最适反应pH的测定 | 第51-52页 |
| 4.4.5 突变体F414S稳定性的测定 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 作者简介及攻读硕士期间的科研成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
