| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 微环境对细胞行为的调控作用 | 第12页 |
| 1.2 生物基材在细胞培养中的应用 | 第12-14页 |
| 1.3 应用于细胞培养的生物基材来源 | 第14-15页 |
| 1.4 生物基材特性对细胞行为的调控作用 | 第15-19页 |
| 1.4.1 生物基材化学性质的影响 | 第15-16页 |
| 1.4.2 生物基材力学特性的影响 | 第16-17页 |
| 1.4.3 生物基材表面拓扑结构的影响 | 第17-19页 |
| 1.4.3.1 微观拓扑结构的影响 | 第18-19页 |
| 1.4.3.2 宏观拓扑结构的影响 | 第19页 |
| 1.5 细胞培养生物基材的合成与制备方法 | 第19-23页 |
| 1.5.1 化学合成及改性手段 | 第20-21页 |
| 1.5.2 三维支架制备技术 | 第21页 |
| 1.5.3 先进微纳米制造技术 | 第21-22页 |
| 1.5.4 脱细胞技术 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究的目的、意义和研究内容 | 第23-25页 |
| 第2章 PDMS表面修饰及力学强度对bAC生物学行为的影响 | 第25-43页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料和方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 PDMS薄膜材料制备及表面处理 | 第25-26页 |
| 2.2.2 接触角测量 | 第26页 |
| 2.2.3 细胞的分离与培养 | 第26-28页 |
| 2.2.3.1 bAC分离 | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 细胞冻存 | 第27页 |
| 2.2.3.3 细胞复苏 | 第27页 |
| 2.2.3.4 细胞的传代培养 | 第27-28页 |
| 2.2.4 bAC在PDMS薄膜上培养 | 第28页 |
| 2.2.5 鬼笔环肽染色 | 第28页 |
| 2.2.6 CCK-8检测 | 第28页 |
| 2.2.7 GAG和DNA含量测定 | 第28-29页 |
| 2.2.8 组织学染色 | 第29页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-42页 |
| 2.3.1 bAC在PDMS薄膜上的粘附情况 | 第29页 |
| 2.3.2 血清孵育处理PDMS薄膜对bAC培养的影响 | 第29-31页 |
| 2.3.3 胶原沉积处理PDMS薄膜对bAC培养的影响 | 第31-34页 |
| 2.3.4 等离子体处理PDMS薄膜对bAC培养的影响 | 第34-36页 |
| 2.3.5 不同表面处理结合PDMS薄膜硬度变化对bAC培养的影响 | 第36-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第3章 不同种类的细胞在PCL薄膜材料上的生物学响应 | 第43-66页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 PCL薄膜的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.1.1 平面PCL旋涂薄膜的制备 | 第44页 |
| 3.2.1.2 PCL电纺纤维薄膜的制备 | 第44页 |
| 3.2.1.3 PCL薄膜的无菌处理 | 第44-45页 |
| 3.2.2 细胞分离与培养 | 第45页 |
| 3.2.2.1 细胞分离 | 第45页 |
| 3.2.2.2 细胞冻存 | 第45页 |
| 3.2.2.3 细胞复苏 | 第45页 |
| 3.2.2.4 细胞传代培养 | 第45页 |
| 3.2.3 细胞接种 | 第45-46页 |
| 3.2.4 扫描电子显微镜 | 第46页 |
| 3.2.4.1 纤维直径和取向测量与分析 | 第46页 |
| 3.2.4.2 细胞和细胞核长度与取向测量 | 第46页 |
| 3.2.5 原子力显微镜 | 第46页 |
| 3.2.6 接触角测量 | 第46页 |
| 3.2.7 CCK-8检测 | 第46页 |
| 3.2.8 鬼笔环肽染色 | 第46-47页 |
| 3.2.9 生物化学分析 | 第47页 |
| 3.2.9.1 DNA和GAG含量的测定 | 第47页 |
| 3.2.9.2 总胶原含量的测定 | 第47页 |
| 3.2.10 组织学染色 | 第47页 |
| 3.2.11 基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.2.11.1 cDNA的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.11.2 RT-PCR | 第48页 |
| 3.2.12 统计学分析 | 第48-50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-65页 |
| 3.3.1 PCL薄膜材料的表面特性 | 第50-52页 |
| 3.3.2 细胞接种早期F肌动蛋白染色 | 第52-54页 |
| 3.3.3 细胞接种早期的形态和取向分析 | 第54-55页 |
| 3.3.4 细胞接种早期SEM观察 | 第55-56页 |
| 3.3.5 不同材料上细胞的粘附情况 | 第56-57页 |
| 3.3.6 细胞长期培养后F肌动蛋白染色 | 第57-59页 |
| 3.3.7 细胞核取向与长度分析 | 第59-60页 |
| 3.3.8 不同材料上细胞的增殖情况 | 第60-61页 |
| 3.3.9 不同材料上细胞的基质分泌情况 | 第61-64页 |
| 3.3.10 基因表达分析 | 第64-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第4章 PCL薄膜表面结构对不同种类细胞的脱细胞基质的影响 | 第66-91页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 材料与方法 | 第66-69页 |
| 4.2.1 PCL薄膜的制备 | 第66-67页 |
| 4.2.2 细胞分离与培养 | 第67页 |
| 4.2.3 细胞接种 | 第67页 |
| 4.2.4 脱细胞过程 | 第67页 |
| 4.2.5 扫描电子显微镜 | 第67页 |
| 4.2.6 CCK-8检测 | 第67页 |
| 4.2.7 鬼笔环肽染色 | 第67页 |
| 4.2.8 免疫荧光染色 | 第67-68页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE | 第68页 |
| 4.2.10 生物化学分析 | 第68页 |
| 4.2.11 组织学染色 | 第68页 |
| 4.2.12 统计学分析 | 第68-69页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第69-90页 |
| 4.3.1 细胞培养孔板上接种细胞培养后的脱细胞处理 | 第69-74页 |
| 4.3.1.1 rMSC脱细胞处理 | 第69-70页 |
| 4.3.1.2 HF脱细胞处理 | 第70-72页 |
| 4.3.1.3 bAC脱细胞处理 | 第72-74页 |
| 4.3.2 不同种类细胞在不同PCL薄膜材料上脱细胞处理 | 第74-85页 |
| 4.3.2.1 rMSC脱细胞处理前后组织化学染色 | 第74-75页 |
| 4.3.2.2 HF脱细胞处理前后组织化学染色 | 第75-76页 |
| 4.3.2.3 bAC脱细胞处理前后组织化学染色 | 第76页 |
| 4.3.2.4 rMSC脱细胞处理前后免疫荧光染色 | 第76-78页 |
| 4.3.2.5 HF脱细胞处理前后免疫荧光染色 | 第78-79页 |
| 4.3.2.6 bAC脱细胞处理前后免疫荧光染色 | 第79-81页 |
| 4.3.2.7 rMSC脱细胞处理前后SEM观察 | 第81-82页 |
| 4.3.2.8 HF脱细胞处理前后SEM观察 | 第82页 |
| 4.3.2.9 bAC脱细胞处理前后SEM观察 | 第82-83页 |
| 4.3.2.10 DNA、 GAG、总胶原定量检测 | 第83-84页 |
| 4.3.2.11 总蛋白含量与SDS-PAGE定性分析 | 第84-85页 |
| 4.3.3 rMSC在dECM/PCL复合材料上的培养 | 第85-90页 |
| 4.3.3.1 粘附情况 | 第86-88页 |
| 4.3.3.2 细胞取向分析 | 第88-89页 |
| 4.3.3.3 细胞增殖情况 | 第89页 |
| 4.3.3.4 细胞基质分泌 | 第89-90页 |
| 4.4 本章小结 | 第90-91页 |
| 第5章 全文总结与展望 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 附:攻读硕士期间发表的论文 | 第103页 |
