| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| 1、热休克蛋白简介 | 第10页 |
| 2、Gp96的分子结构和功能 | 第10-18页 |
| 2.1、Gp96的分子结构 | 第10-11页 |
| 2.2、Gp96的功能和应用研究 | 第11-14页 |
| 2.3、Gp96与肿瘤免疫治疗 | 第14页 |
| 2.4、Gp96与肿瘤发生与发展的研究 | 第14-15页 |
| 2.5、Gp96与肝细胞癌 | 第15-18页 |
| 第二章 热休克蛋白gp96促进肝细胞癌的发生 | 第18-60页 |
| 1、实验材料 | 第18-21页 |
| 1.1、细胞培养 | 第18页 |
| 1.2、质粒和siRNA | 第18页 |
| 1.3、抗体 | 第18-19页 |
| 1.4、其他试剂 | 第19页 |
| 1.5、用于real-time PCR的引物序列 | 第19-20页 |
| 1.6、主要溶液配制 | 第20-21页 |
| 2、实验方法 | 第21-34页 |
| 2.1、质粒构建 | 第21-22页 |
| 2.2、RNA提取、反转录和Real time PCR | 第22-23页 |
| 2.3、蛋白纯化 | 第23页 |
| 2.4、免疫共沉淀coIP | 第23-24页 |
| 2.5、GSTpull-down assay | 第24-25页 |
| 2.6、免疫组化(IHC) | 第25-26页 |
| 2.7、细胞周期分析 | 第26-27页 |
| 2.8、细胞凋亡检测 | 第27页 |
| 2.9、细胞免疫荧光 | 第27-29页 |
| 2.10、体外泛素化检测 | 第29-30页 |
| 2.11、小鼠异源移植 | 第30页 |
| 2.12、AAH-APO-1芯片操作流程 | 第30-31页 |
| 2.13、逆转录病毒包装gp96 siRNA并构建稳定转染细胞系 | 第31-33页 |
| 2.14、统计分析 | 第33-34页 |
| 3、实验结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1、质粒信息的正确性 | 第34页 |
| 3.2、Gp96稳定低表达细胞系构建 | 第34-35页 |
| 3.3、Gp96对肝癌细胞增殖,凋亡以及细胞周期的调控 | 第35-37页 |
| 3.4、凋亡蛋白组学分析 | 第37-40页 |
| 3.5、P53在gp96介导的细胞凋亡起到关键作用 | 第40-42页 |
| 3.6、Gp96促进p53的泛素化降解 | 第42-44页 |
| 3.7、Gp96与p53和Mdm2相互作用 | 第44-45页 |
| 3.8、Gp96促进Mdm2的泛素连接酶活性 | 第45-47页 |
| 3.9、Gp96在细胞质基质中存在亚群分布 | 第47-48页 |
| 3.10、体内条件下靶向gp96可抑制肿瘤的生长 | 第48-50页 |
| 4、讨论 | 第50-52页 |
| 5、参考文献 | 第52-60页 |
| 个人简历和发表文章 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
