| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 文献综述 | 第10-16页 |
| 1 病原微生物简介 | 第10页 |
| 2 志贺氏菌简介 | 第10-12页 |
| 2.1 志贺氏菌流行病学 | 第10页 |
| 2.2 志贺氏菌的致病途径及机制 | 第10-11页 |
| 2.3 志贺氏菌的抗酸机制 | 第11-12页 |
| 2.4 志贺氏菌的毒力大质粒和Ⅲ型分泌系统 | 第12页 |
| 3 鼠疫耶尔森氏菌简介 | 第12-14页 |
| 3.1 鼠疫耶尔森氏菌的流行病学 | 第13页 |
| 3.2 鼠疫耶尔森氏菌的致病途径及机制 | 第13页 |
| 3.3 鼠疫耶尔森氏菌的pCD1质粒和Ⅲ型分泌系统 | 第13-14页 |
| 4 BN-PAGE的简介 | 第14-15页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第一章 病原菌蛋白复合物研究 | 第16-24页 |
| 1 材料及试剂耗材 | 第16-17页 |
| 1.1 菌株 | 第16-17页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第17页 |
| 1.3 实验用溶液配制 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.1 志贺氏菌全菌复合物蛋白样品制备 | 第17页 |
| 2.2 志贺氏菌膜复合物蛋白样品制备 | 第17-18页 |
| 2.3 BN-PAGE各成分胶的配制 | 第18页 |
| 2.4 BN-PAGE分离复合物 | 第18页 |
| 2.5 Western blot | 第18-19页 |
| 3 实验结果 | 第19-21页 |
| 3.1 与ATP合成酶有关的复合物结果 | 第19-20页 |
| 3.2 与IpaB毒力有关的复合物结果 | 第20页 |
| 3.3 与谷氨酸脱羧酶GadB有关的复合物结果 | 第20-21页 |
| 3.4 鼠疫耶尔森氏菌的复合物结果 | 第21页 |
| 4 讨论与分析 | 第21-24页 |
| 第二章 鼠疫菌201野生株和201△pCD1缺失突变株蛋白表达谱的比较研究 | 第24-35页 |
| 1 材料与仪器试剂 | 第24页 |
| 1.1 菌株 | 第24页 |
| 1.2 主要化学试剂耗材和仪器 | 第24页 |
| 1.3 常用溶液的配制 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.1 双向电泳 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株培养 | 第24页 |
| 2.1.2 全菌蛋白样品制备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 蛋白质样品纯化 | 第25页 |
| 2.1.4 上样前处理纯化样品和水化 | 第25页 |
| 2.1.5 等电聚焦 | 第25页 |
| 2.1.6 胶条的平衡 | 第25-26页 |
| 2.1.7 二向电泳 | 第26页 |
| 2.1.8 染色及脱色 | 第26页 |
| 2.1.9 图像扫描 | 第26页 |
| 2.1.10 胶内酶切 | 第26页 |
| 2.1.11 蛋白差异点的MALDI-TOF质谱检测 | 第26页 |
| 2.1.12 数据库查询 | 第26页 |
| 3 实验结果 | 第26-33页 |
| 3.1 野生株与突变株双向电泳图谱 | 第27-28页 |
| 3.2 201野生株与201△pCD1突变株差异蛋白质谱结果鉴定 | 第28-33页 |
| 3.2.1 在26℃培养条件下201野生株和201△pCD1缺失突变株差异表达蛋白 | 第28-30页 |
| 3.2.2 在37℃培养条件下201野生株和201△pCD1缺失突变株差异表达蛋白 | 第30-32页 |
| 3.2.3 质粒编码的鼠疫毒力相关蛋白 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 301△gadA及301△gadA：：gadB缺失突变株构建及谷氨酸脱羧酶功能研究 | 第35-43页 |
| 1 材料与仪器试剂 | 第35页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第35页 |
| 1.2 仪器和试剂 | 第35页 |
| 1.3 实验用的溶液配制 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 301△gadA及301△gadA：：gadB缺失突变株构建 | 第35-38页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第35-36页 |
| 2.1.2 线性打靶片段的构建 | 第36-37页 |
| 2.1.3 301/pKOBEG和301△gadB/pKOBEG菌株的构建 | 第37页 |
| 2.1.4 301 △gadA：：kan和301 AgadA-gadB：：kan突变株的构建 | 第37-38页 |
| 2.1.5 抗性基因的去除 | 第38页 |
| 2.2 301△gadA、301△gadB及301△gadA：：gadB缺失突变株双向电泳 | 第38页 |
| 2.3 2457T野生株和2457T△hns突变株的磁珠捕获实验 | 第38-39页 |
| 2.3.1 调控区DNA的获得 | 第38页 |
| 2.3.2 调控区DNA与磁珠相互作用 | 第38-39页 |
| 2.3.3 磁珠捕获相互作用蛋白 | 第39页 |
| 2.3.4 相互作用蛋白双向电泳及质谱鉴定 | 第39页 |
| 3 实验结果 | 第39-42页 |
| 3.1 线性打靶片段的构建结果 | 第39页 |
| 3.2 301△gadA：：kan和301 △gadA-gadB：：kan突变株的构建结果 | 第39-40页 |
| 3.3 301野生株、301△gadA、301 △gadB及301 △gadA：：gadB缺失突变株双向电泳结果 | 第40-41页 |
| 3.4 2457T野生株和2457T△hns突变株GadA/GadB相互作用蛋白磁珠捕获双向电泳结果 | 第41页 |
| 3.5 2457T野生株和2457T△hns突变株GadA/GadB相互作用蛋白磁珠捕获质谱鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 总结和展望 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录Ⅰ 各种试剂盒使用步骤 | 第49-51页 |
| 附录Ⅱ 实验中所用仪器设备 | 第51-52页 |
| 附录Ⅲ 实验中所用试剂 | 第52-54页 |
| 附录Ⅳ 缩略词 | 第54页 |
| 附录Ⅴ 实验中常用溶液配制 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
