| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 粘虫 | 第13-15页 |
| 1.1.1 粘虫的生物习性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 粘虫的危害特点 | 第14页 |
| 1.1.3 粘虫的防治技术 | 第14-15页 |
| 1.2 昆虫丝氨酸蛋白酶的分类与结构 | 第15页 |
| 1.3 昆虫丝氨酸蛋白酶的分子生物学研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 基因克隆 | 第15-16页 |
| 1.3.2 丝氨酸蛋白酶的重组表达 | 第16页 |
| 1.3.3 丝氨酸蛋白酶在昆虫体内的重要作用 | 第16-17页 |
| 1.4 RNAi技术与害虫防治 | 第17-18页 |
| 1.5 本试验的研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 试验昆虫及饲养方法 | 第20页 |
| 2.2 主要试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 粘虫中肠丝氨酸蛋白酶基因的克隆 | 第21-25页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.3.2 丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆 | 第22-24页 |
| 2.3.3 丝氨酸蛋白酶cDNA全长序列的获得 | 第24-25页 |
| 2.3.4 序列分析 | 第25页 |
| 2.4 丝氨酸蛋白酶基因的原核表达及活性测定 | 第25-28页 |
| 2.4.1 原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.4.2 重组蛋白的诱导表达与SDS-PAGE检测 | 第26-27页 |
| 2.4.3 重组蛋白的Western blot验证 | 第27-28页 |
| 2.4.4 重组蛋白的变性、纯化与复性 | 第28页 |
| 2.4.5 丝氨酸蛋白酶重组蛋白的活性测定 | 第28页 |
| 2.5 丝氨酸蛋白酶基因的分子特性及功能研究 | 第28-30页 |
| 2.5.1 丝氨酸蛋白酶基因的时空表达模式分析 | 第28页 |
| 2.5.2 丝氨酸蛋白酶基因对于饥饿处理的表达模式分析 | 第28-29页 |
| 2.5.3 丝氨酸蛋白酶基因对于蜕皮激素的表达模式分析 | 第29页 |
| 2.5.4 丝氨酸蛋白酶基因对于Bt（Cry1Ac）原毒素的表达模式分析 | 第29页 |
| 2.5.5 荧光定量PCR（Real-time PCR）检测 | 第29-30页 |
| 2.6 RNAi研究 | 第30-34页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 2.6.2 dsRNA的合成 | 第31-32页 |
| 2.6.3 dsRNA的注射 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-57页 |
| 3.1 MsT和MsCT基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.1 RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 MsT和MsCT cDNA的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2 MsT和MsCT基因的序列分析及系统发育分析 | 第35-41页 |
| 3.2.1 MsT和MsCT基因的序列分析 | 第35-36页 |
| 3.2.2 MsT和MsCT基因的系统发育分析 | 第36-41页 |
| 3.3 MsT和MsCT基因的原核表达及活性测定 | 第41-46页 |
| 3.3.1 重组蛋白的诱导表达及Western blot验证 | 第41-44页 |
| 3.3.2 丝氨酸蛋白酶重组蛋白的纯化、复性和活性测定 | 第44-46页 |
| 3.4 MsT和MsCT基因的分子特性及功能研究 | 第46-52页 |
| 3.4.1 荧光定量PCR引物特异性检测 | 第46-47页 |
| 3.4.2 MsT和MsCT基因的时空表达模式分析 | 第47-48页 |
| 3.4.3 饥饿处理对MsT和MsCT基因表达量的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.4 不同浓度的蜕皮激素对MsT和MsCT基因表达量的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.5 Cry1Ac原毒素对MsT和MsCT基因表达量的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 MsT和MsCT基因的RNA干扰研究 | 第52-57页 |
| 3.5.1 dsRNA的合成 | 第52-53页 |
| 3.5.2 dsRNA注射剂量的确定 | 第53-54页 |
| 3.5.3 MsT和MsCT基因的RNA干扰效果 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 MsT和MsCT基因的克隆及序列分析 | 第57页 |
| 4.2 MsT和MsCT基因的原核表达及活性分析 | 第57-58页 |
| 4.3 MsT和MsCT基因的功能研究 | 第58-61页 |
| 4.3.1 利用荧光定量PCR进行功能研究 | 第58-59页 |
| 4.3.2 利用RNA干扰技术进行功能研究 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
