| 附件 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 植物抗病信号转导途径 | 第13-14页 |
| 1.1.1 植物先天免疫系统 | 第13页 |
| 1.1.2 系统性获得抗性 | 第13-14页 |
| 1.1.3 诱导系统抗性 | 第14页 |
| 1.1.4 抗病信号转导途径的关系 | 第14页 |
| 1.2 泛素／26S蛋白酶体途径 | 第14-16页 |
| 1.2.1 E3泛素连接酶类SCF信号复合体 | 第15页 |
| 1.2.2 SCF介导的R基因的抗性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 SCF~(COI1)参与的茉莉酸反应 | 第16页 |
| 1.2.4 SCF~(EBF1/EBF2)介导的乙烯反应 | 第16页 |
| 1.3 棉花抗黄萎病相关信号途径 | 第16页 |
| 1.4 基因的电子克隆与RACE技术 | 第16-17页 |
| 1.4.1 基因的电子克隆技术 | 第16-17页 |
| 1.4.2 RACE技术 | 第17页 |
| 1.5 基因功能研究-病毒诱导的基因沉默技术 | 第17页 |
| 1.6 基因功能研究-超表达技术 | 第17-18页 |
| 1.7 研究目的、意义与内容 | 第18-20页 |
| 1.7.1 研究目的与意义 | 第18页 |
| 1.7.2 本研究的实验内容 | 第18-19页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 棉花GhSKIP35基因的克隆 | 第20-31页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 酶、试剂盒、常用生化试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要生物信息学网站和软件 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 材料的种植 | 第21页 |
| 2.2.2 CTAB法提取棉花幼根总RNA | 第21-22页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第22页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.5 GhSKIP35基因的PCR扩增 | 第22-26页 |
| 2.2.6 GhSKIP35基因全长连接T载体及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 GhSKIP35基因的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 棉花幼根总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.2 GhSKIP35基因的cDNA克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.3 GhSKIP35基因的ORF | 第28-29页 |
| 2.3.4 GhSKIP35基因的蛋白质保守区域分析 | 第29页 |
| 2.3.5 SKIP35同源基因的多重比对与进化树的构建 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 棉花GhSKIP35基因的表达分析 | 第31-36页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第31页 |
| 3.1.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.3 试剂盒 | 第31页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 棉花材料的培养 | 第31页 |
| 3.2.2 病原菌的培养 | 第31页 |
| 3.2.3 病原菌的接种方法 | 第31-32页 |
| 3.2.4RNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.5 cDNA的合成 | 第32页 |
| 3.2.6 引物设计 | 第32页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-35页 |
| 3.3.1 病原菌的培养 | 第33-34页 |
| 3.3.2 Gh SKIP35基因荧光定量PCR标准曲线 | 第34页 |
| 3.3.3 Gh SKIP35基因荧光定量分析 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 VIGS研究GhSKIP35基因的功能 | 第36-44页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第36页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 4.1.2 载体和菌株 | 第36页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 4.1.4 试剂盒 | 第36页 |
| 4.1.5 试剂的配制 | 第36页 |
| 4.2 试验方法 | 第36-39页 |
| 4.2.1RNA的提取及cDNA的合成 | 第36页 |
| 4.2.2 目的片段的扩增 | 第36-37页 |
| 4.2.3 目的片段回收 | 第37页 |
| 4.2.4 目的片段连接T载体及转化 | 第37页 |
| 4.2.5 VIGS沉默载体的构建 | 第37-38页 |
| 4.2.6 VIGS沉默载体pCLCrVA-GhSKIP35转入农杆菌菌株 | 第38-39页 |
| 4.2.7 子叶注射法农杆菌接种 | 第39页 |
| 4.2.8RNA提取及荧光定量PCR检查沉默效率 | 第39页 |
| 4.2.9 沉默植株抗病性检测 | 第39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 4.3.1 Gh SKIP35沉默片段的扩增 | 第39-40页 |
| 4.3.2 中间载体T-GhSKIP35的SpeI和AscI双酶切 | 第40页 |
| 4.3.3 VIGS沉默载体pCLCrVA-GhSKIP35的SpeI和AscI双酶切 | 第40-41页 |
| 4.3.4 农杆菌菌落PCR验证 | 第41页 |
| 4.3.5 沉默载体在中植棉KV3中沉默目的基因的效率 | 第41-42页 |
| 4.3.6 沉默植株抗病性检测 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 超量表达研究GhSKIP35基因的功能 | 第44-54页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第44页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 5.1.2 载体和菌株 | 第44页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 5.1.4 试剂盒 | 第44页 |
| 5.1.5 试剂的配制 | 第44页 |
| 5.2 试验方法 | 第44-49页 |
| 5.2.1 棉花RNA的提取及cDNA的合成 | 第44页 |
| 5.2.2 Gh SKIP35基因全长的扩增 | 第44页 |
| 5.2.3 Gh SKIP35基因全长的回收 | 第44页 |
| 5.2.4 Gh SKIP35基因全长的连接T载体及转化 | 第44-45页 |
| 5.2.5 超量表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 5.2.6 超量表达载体pPZP111-EGFP-GhSKIP35转入农杆菌菌株 | 第46-47页 |
| 5.2.7 农杆菌浸染花序转化法接种 | 第47页 |
| 5.2.8 Kan抗性筛选转基因拟南芥 | 第47页 |
| 5.2.9 PCR检测GhSKIP35在拟南芥中是否表达 | 第47-48页 |
| 5.2.10 荧光定量PCR检测超表达效率 | 第48-49页 |
| 5.3 结果与分析 | 第49-53页 |
| 5.3.1 Gh SKIP35基因全长的扩增 | 第49-50页 |
| 5.3.2 中间载体T-GhSKIP35的SpeI和XbaI双酶切 | 第50页 |
| 5.3.3 超表达载体pPZP111-EGFP-GhSKIP35的SpeI和XbaI双酶切 | 第50页 |
| 5.3.4 农杆菌菌落PCR验证 | 第50-51页 |
| 5.3.5 Kan抗性筛选转基因拟南芥 | 第51页 |
| 5.3.6 PCR检测GhSKIP35在拟南芥中是否表达 | 第51-52页 |
| 5.3.7 荧光定量PCR检测GhSKIP35在拟南芥中的表达效率 | 第52页 |
| 5.3.8 超表达植株抗病性检测 | 第52-53页 |
| 5.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录:GhSKIP35基因（登录号：KM894147）全长及氨基酸序列 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
