| 摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 棉花黄萎病及其危害 | 第13-14页 |
| 1.1.1 棉花黄萎病菌的概述 | 第13页 |
| 1.1.2 棉花黄萎病的危害 | 第13-14页 |
| 1.2 黄萎病菌侵染过程及致病机理 | 第14-15页 |
| 1.3 大丽轮枝菌致病相关基因的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 大丽轮枝菌中功能基因的研究技术 | 第16-17页 |
| 1.4.1 基因组学途径 | 第16页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第16-17页 |
| 1.4.3 荧光定量技术 | 第17页 |
| 1.4.4 其他技术 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 棉花黄萎病菌致病相关基因的克隆及生物信息学分析 | 第19-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 棉花黄萎病菌菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 棉花黄萎病菌的培养与基因组DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 棉花黄萎病菌RNA的提取和反转录 | 第20-21页 |
| 2.2.3 致病相关基因VdPR1和VdPR3克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.4 致病相关基因连接T1载体、转化大肠杆菌及测序 | 第22-23页 |
| 2.2.5 致病相关基因VdPR1和VdPR3的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.3.1 致病相关基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.3.2 致病相关基因的生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 棉花黄萎病菌致病相关基因敲除和互补载体的构建 | 第26-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第26页 |
| 3.1.2 培养基、试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 3.2.1 大丽轮枝菌基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 3.2.2 敲除载体的构建 | 第27-31页 |
| 3.2.3 互补载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-36页 |
| 3.3.1 敲除载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 敲除重组质粒转化大肠杆菌及农杆菌 | 第34-35页 |
| 3.3.3 互补载体的构建 | 第35页 |
| 3.3.4 互补重组质粒转化大肠杆菌及农杆菌 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 棉花黄萎病菌致病相关基因敲除和互补突变体的获得及鉴定 | 第37-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.1.1 菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 抗生素、培养基及其配制 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 4.2.1 敲除突变体的获得 | 第37-38页 |
| 4.2.2 敲除突变体的鉴定 | 第38-40页 |
| 4.2.3 互补突变体的获得 | 第40页 |
| 4.2.4 互补突变体的鉴定 | 第40-42页 |
| 4.3 实验结果 | 第42-45页 |
| 4.3.2 敲除突变体的筛选及鉴定 | 第42-44页 |
| 4.3.3 互补突变体的筛选及鉴定 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 棉花黄萎病菌致病相关基因的功能研究 | 第47-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.1.1 菌株及鉴别寄主棉花 | 第47页 |
| 5.1.2 抗生素、培养基及其配制 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 5.2.1 突变体菌落形态观察和生长速率测定 | 第47页 |
| 5.2.2 突变体产孢量和粗毒素含量测定 | 第47-48页 |
| 5.2.3 突变体胞外酶活性的测定 | 第48页 |
| 5.2.4 突变体致病力的测定 | 第48页 |
| 5.2.5 棉花根系提取物对突变体产孢量的影响 | 第48-49页 |
| 5.2.6 qPCR测定植物组织中的V. dahliae的生物量 | 第49-50页 |
| 5.3 实验结果 | 第50-58页 |
| 5.3.1 突变体菌落形态观察和生长速率测定 | 第50-51页 |
| 5.3.2 突变体产孢量和粗毒素的测定 | 第51-52页 |
| 5.3.3 突变体胞外酶活性的测定 | 第52-54页 |
| 5.3.4 突变体的致病力测定 | 第54-56页 |
| 5.3.5 棉花根系提取物对突变体产孢量的影响 | 第56-57页 |
| 5.3.6 qPCR测定植物组织中的V. dahliae的生物量 | 第57-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
