| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-25页 |
| 1.1 伪狂犬病毒概述 | 第16页 |
| 1.2 PRV基因组结构及编码蛋白功能 | 第16-18页 |
| 1.3 PRV主要保护性抗原 | 第18-19页 |
| 1.4 糖蛋白B研究进展 | 第19页 |
| 1.5 CRISPR/CAS9基因编辑技术 | 第19-23页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 PRV JS-2012 株主要保护性抗原蛋白序列分析 | 第25-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 基因组序列 | 第25页 |
| 2.1.2 主要保护性抗原蛋白进化树分析 | 第25页 |
| 2.1.3 主要保护性抗原蛋白氨基酸序列比对 | 第25-26页 |
| 2.2 结果 | 第26-30页 |
| 2.2.1 gB蛋白生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2 gC蛋白生物信息学分析 | 第27-29页 |
| 2.2.3 gD蛋白生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 使用CRISPR/CAS9构建GB替换重组病毒 | 第32-53页 |
| 3.1 材料和方法 | 第32-42页 |
| 3.1.1 病毒、细胞、质粒 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.3 重组病毒构建设计原理 | 第33-34页 |
| 3.1.4 CRISPR/Cas9质粒构建 | 第34-37页 |
| 3.1.5 同源重组供体质粒构建 | 第37-40页 |
| 3.1.6 重组病毒的拯救 | 第40页 |
| 3.1.7 重组病毒的筛选纯化 | 第40-41页 |
| 3.1.8 病毒生长曲线的绘制 | 第41页 |
| 3.1.9 空斑形成试验 | 第41-42页 |
| 3.1.10 小鼠致病性检测 | 第42页 |
| 3.1.11 统计学分析 | 第42页 |
| 3.2 结果 | 第42-50页 |
| 3.2.1 CRISPR/CAS9的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2 供体质粒的构建和鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 重组病毒的拯救 | 第44-45页 |
| 3.2.4 重组病毒的筛选与纯化 | 第45-47页 |
| 3.2.5 重组病毒生物学特性鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.6 重组病毒小鼠致病力检测 | 第48-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 GB替换重组病毒小鼠免疫原性差异分析 | 第53-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 4.1.1 病毒和细胞 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第53页 |
| 4.1.3 灭活疫苗的制备 | 第53-54页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第54页 |
| 4.1.5 小鼠免疫攻毒模型的建立试验设计 | 第54页 |
| 4.1.6 gB免疫原性差异评价小鼠试验设计 | 第54-55页 |
| 4.2 结果 | 第55-60页 |
| 4.2.1 小鼠免疫攻毒模型的建立并确立了JS2012ΔgE/gI灭活疫苗小鼠模型最小免疫剂量 | 第55-56页 |
| 4.2.2 gB替换显著改变了Bartha-K61和JS2012ΔgE/gI的免疫原性 | 第56-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-61页 |
| 第五章 使用CRISPR/CAS9构建GC互换重组病毒 | 第61-75页 |
| 5.1 材料和方法 | 第61-68页 |
| 5.1.1 病毒、细胞、质粒 | 第61页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第61页 |
| 5.1.3 重组病毒构建策略 | 第61-63页 |
| 5.1.4 CRISPR/Cas9质粒构建 | 第63-64页 |
| 5.1.5 同源重组供体质粒构建 | 第64-66页 |
| 5.1.6 重组病毒的拯救 | 第66-67页 |
| 5.1.7 重组病毒的筛选纯化 | 第67-68页 |
| 5.2 结果 | 第68-73页 |
| 5.2.1 CRISPR/Cas9的构建 | 第68页 |
| 5.2.2 供体质粒的构建和鉴定 | 第68-69页 |
| 5.2.3 重组病毒的拯救 | 第69-70页 |
| 5.2.4 重组病毒的筛选与纯化 | 第70-73页 |
| 5.3 讨论 | 第73-75页 |
| 第六章 全文结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
