| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第15-26页 |
| 1. 副溶血弧菌 | 第15-16页 |
| 1.1 副溶血弧菌的毒力 | 第15-16页 |
| 1.2 副溶血弧菌的危害 | 第16页 |
| 2. 常见的原核生物基因重组方法 | 第16-18页 |
| 2.1 化学法 | 第16-17页 |
| 2.2 电击转化法 | 第17页 |
| 2.3 三亲本杂交 | 第17-18页 |
| 3. 先天免疫 | 第18-21页 |
| 3.1 斑马鱼嗜中性粒细胞在先天免疫中的作用 | 第19-20页 |
| 3.2 先天免疫分子 | 第20-21页 |
| 4. Notch分子在免疫中的作用 | 第21-24页 |
| 4.1 Notch信号通路的概述 | 第21-23页 |
| 4.2 Notch信号对嗜中性粒细胞的负向调控作用 | 第23-24页 |
| 5. 报告基因 | 第24页 |
| 6. 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 利用三亲本杂交标记副溶血弧菌Vp57 | 第26-33页 |
| 1. 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.2 主要仪器 | 第27页 |
| 1.3 实验菌株 | 第27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.1 复苏Vp57及S17-1λpir | 第27-28页 |
| 2.2 pVSV209质粒转化 | 第28页 |
| 2.3 三亲本杂交 | 第28页 |
| 2.4 荧光正置显微镜观察 | 第28-29页 |
| 2.5 PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.6 16SrRNA测序 | 第29-30页 |
| 3. 实验结果 | 第30-32页 |
| 3.1 荧光显微镜观察 | 第30-31页 |
| 3.2 PCR结果 | 第31页 |
| 3.3 16SrRNA测序 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 副溶血弧菌Vp57在标记前后生理特性的比较 | 第33-44页 |
| 1. 实验材料 | 第34页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 2. 实验方法 | 第34-37页 |
| 2.1 菌液准备 | 第34-35页 |
| 2.2 Vp57和Vp57~(RFP)生长曲线的绘制 | 第35页 |
| 2.3 质粒稳定性检测 | 第35-36页 |
| 2.4 Vp57与Vp57~(RFP)的毒力测定 | 第36页 |
| 2.5 斑马鱼感染后的临床症状及细菌分离 | 第36页 |
| 2.6 病理切片 | 第36-37页 |
| 3. 实验结果 | 第37-43页 |
| 3.1 Vp57与Vp57~(RFP)的生长曲线 | 第37-38页 |
| 3.2 质粒pVSV209的稳定性 | 第38-39页 |
| 3.3 Vp57与Vp57~(RFP)的毒力 | 第39-40页 |
| 3.4 临床症状及细菌分离 | 第40-42页 |
| 3.5 病理切片 | 第42-43页 |
| 4．讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 Vp57~(RFP)和斑马鱼嗜中性粒细胞的动态变化研究 | 第44-56页 |
| 1. 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器 | 第45-46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-48页 |
| 2.1 嗜中性粒细胞形态学观察 | 第46页 |
| 2.2 菌液准备 | 第46-47页 |
| 2.3 显微注射 | 第47页 |
| 2.4 荧光正置显微镜观察 | 第47-48页 |
| 3. 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.1 嗜中性粒细胞形态学观察 | 第48页 |
| 3.2 Vp57~(RFP)的感染路径及其与嗜中性粒细胞的相互作用 | 第48-53页 |
| 3.3 细菌对斑马鱼致死现象的观察与统计 | 第53-54页 |
| 4. 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 Notch1a参与Vp引起的嗜中性粒细胞相关基因的应答变化 | 第56-70页 |
| 1. 实验材料 | 第57-58页 |
| 1.1 实验菌株 | 第57页 |
| 1.2 实验用鱼 | 第57页 |
| 1.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.4 主要仪器 | 第58页 |
| 2. 实验方法 | 第58-61页 |
| 2.1 菌液准备 | 第58页 |
| 2.2 显微注射 | 第58-59页 |
| 2.3 斑马鱼卵及幼鱼的浸泡感染 | 第59页 |
| 2.4 Trizol法提胚胎总RNA | 第59页 |
| 2.5 反转录获得cDNA | 第59-60页 |
| 2.6 荧光定量PCR（Q-PCR）检测细胞因子及补体基因的变化 | 第60-61页 |
| 3. 实验结果 | 第61-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-70页 |
| 第六章 斑马鱼细胞因子启动子的构建和报告基因载体的活性分析 | 第70-84页 |
| 1. 材料与方法 | 第71-72页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第71页 |
| 1.2 试剂 | 第71页 |
| 1.3 主要仪器 | 第71-72页 |
| 2. 实验方法 | 第72-74页 |
| 2.1 斑马鱼细胞因子启动子的预测及其转录因子结合位点分析 | 第72页 |
| 2.2 斑马鱼基因组提取及细胞因子启动子的PCR扩增 | 第72页 |
| 2.3 报告基因pGL3-Enhancer载体的构建 | 第72-73页 |
| 2.4 报告基因载体转染细胞后荧光素酶表达活性测定 | 第73-74页 |
| 3. 结果与分析 | 第74-82页 |
| 3.1 tnfb、il11b和il13启动子转录因子结合位点分析 | 第74-80页 |
| 3.2 tnfb、il11b和il13启动子序列的扩增 | 第80页 |
| 3.3 tnfb、il11b和il13报告基因载体的构建 | 第80-81页 |
| 3.4 细胞因子报告基因在Raw264.7细胞中的表达 | 第81-82页 |
| 4. 讨论 | 第82-84页 |
| 总结和展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
