| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 英文缩略词表 | 第12-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-23页 |
| 1 单克隆抗体 | 第16-18页 |
| 2 哺乳动物细胞表达系统 | 第18-19页 |
| 3 慢病毒载体对于抗CD20抗体2F2的研究 | 第19-20页 |
| 4 高通量分选技术对抗CD20抗体表达量的研究 | 第20页 |
| 5 轻重链基因比率在哺乳动物细胞表达系统中的应用 | 第20-22页 |
| 6 本研究主要创新点 | 第22-23页 |
| 第二章 慢病毒载体对全人源抗CD20抗体2F2的研究 | 第23-40页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料及基本操作 | 第23-32页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验菌株和细胞 | 第24页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 相关溶液的配制 | 第25-29页 |
| 2.2.5 基本操作 | 第29-32页 |
| 2.3 实验步骤和方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 慢病毒载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 慢病毒载体的包装 | 第33页 |
| 2.3.3 经包装的慢病毒颗粒感染CHO靶细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.4 病毒颗粒二次、三次、四次感染CHO靶细胞 | 第34页 |
| 2.3.5 稳定单克隆细胞株的筛选 | 第34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-38页 |
| 2.4.1 慢病毒表达载体构建 | 第34-36页 |
| 2.4.2 经包装的慢病毒颗粒感染CHO细胞 | 第36页 |
| 2.4.3 慢病毒颗粒多次感染CHO细胞结果比较 | 第36-37页 |
| 2.4.4 克隆筛选 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 应用高通量分选方法筛选表达抗CD20抗体细胞株 | 第40-63页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验仪器和实验试剂 | 第40-42页 |
| 3.2.1 细胞和试剂 | 第40页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.3 相关溶液配制 | 第41页 |
| 3.2.4 基础操作 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-52页 |
| 3.3.0 重组表达质粒p-H-IRES-YFP和p-L-IRES-GFP的构建 | 第42-48页 |
| 3.3.1 高表达载体pMH3-H-IRES-YFP和pMH3-L-IRES-GFP的构建 | 第48-51页 |
| 3.3.2 脂质体转染CHO细胞及二次转染 | 第51页 |
| 3.3.3 药物筛选及流式细胞分选 | 第51-52页 |
| 3.4 实验结果 | 第52-62页 |
| 3.4.1 真核表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.4.2 脂质体转染以及脂质体二次转染实验 | 第55-57页 |
| 3.4.3 G418筛选实验 | 第57-58页 |
| 3.4.4 流式细胞仪分选实验 | 第58-59页 |
| 3.4.5 单克隆筛选实验 | 第59-60页 |
| 3.4.6 FACS~((+))及FACS~((-))结果比较 | 第60-61页 |
| 3.4.7 抗CD20抗体2F2的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 抗体轻重链比应用于提高CHO细胞表达全人源化抗CD20抗体2F2的研究 | 第63-73页 |
| 4.1 前言 | 第63-64页 |
| 4.2 实验材料及基本操作 | 第64页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第64页 |
| 4.2.2 实验菌株和细胞 | 第64页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第64页 |
| 4.2.4 相关溶液的配制 | 第64页 |
| 4.2.5 基本操作 | 第64页 |
| 4.3 实验步骤与方法 | 第64-67页 |
| 4.3.1 重组表达质粒p-L-IRES-H的构建 | 第64-66页 |
| 4.3.2 脂质体转染CHO细胞 | 第66-67页 |
| 4.3.3 药物筛选及稳定单克隆株挑取 | 第67页 |
| 4.4 实验结果 | 第67-71页 |
| 4.4.1 真核表达载体构建 | 第67-69页 |
| 4.4.2 单克隆筛选实验 | 第69-70页 |
| 4.4.4 IRES~((-))真核表达载体与IRES~((+))真核表达载体的比较 | 第70-71页 |
| 4.5 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 综述 CHO细胞中抗体的高表达的策略 | 第81-93页 |
| References | 第88-93页 |
| 作者简历及在读期间主要研究成果 | 第93页 |
