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对虾白斑综合症病毒(WSSV)核衣壳蛋白VP15功能及衣壳粒组装的初步研究

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-14页
前言第14-40页
 1 对虾白斑综合症病毒(WSSV)及其分子生物学研究第14-32页
   ·对虾白斑综合症病毒的研究概况第14-20页
     ·对虾白斑综合症病毒的发现及其命名第14-15页
     ·对虾白斑综合症病毒的形态结构第15-16页
     ·对虾白斑综合症的症状与病理变化第16-17页
     ·对虾白斑综合症病毒的感染宿主及替代宿主第17-18页
     ·对虾白斑综合症病毒的传播途径第18页
     ·对虾白斑综合症病毒在宿主体内的感染组装第18-20页
     ·对虾白斑综合症病毒在对虾体内的感染增殖第20页
   ·对虾白斑综合症病毒的分离纯化第20-21页
   ·对虾白斑综合症病毒的基因组学研究第21-24页
   ·对虾白斑综合症病毒的蛋白质组学研究第24-32页
     ·对虾白斑综合症病毒的结构蛋白第25-32页
     ·对虾白斑综合症病毒的非结构蛋白第32页
 2 RNA 干扰的研究进展第32-37页
   ·RNA 干扰现象的发现第32页
   ·RNA 干扰的作用机理第32-33页
   ·RNA 干扰技术的主要应用第33-37页
 3 本论文研究的内容、目的和意义第37-40页
第一部分 对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白 VP15 的初步研究第40-63页
 1 前言第40页
 2 材料与方法第40-51页
   ·材料第40-42页
   ·方法第42-51页
     ·WSSV 病毒及VP15 的提取第42-44页
     ·Superdex G-200 凝胶过滤色谱层析分析VP15 多聚体状态第44-45页
     ·VP15 与核酸最小结合片段研究第45-46页
     ·VP15 与核衣壳蛋白相互作用研究第46-47页
     ·VP15 长双链RNA 的合成与对病毒增殖及包装的干扰第47-51页
 3 结果第51-61页
   ·VP15 的纯化第51-52页
   ·VP15 多聚体状态分析第52页
   ·VP15 与核酸最小结合片段研究第52-55页
     ·DNA –Protein interaction: Electrophoretic mobility shift assay第52-54页
     ·DNA –Protein interaction: dot spot第54-55页
   ·VP15 与衣壳蛋白相互作用研究第55-57页
     ·Far-western 分析VP15 与衣壳蛋白相互作用第55-56页
     ·结合共沉淀进一步确定VP15 与衣壳蛋白无相互作用第56-57页
   ·VP15 长双链RNA 的合成与对病毒增殖及包装的干扰第57-61页
     ·vp15-dsRNA 和 gfp-dsRNA 制备第57-58页
     ·vp15-dsRNA 干扰了VP15 基因的转录第58-59页
     ·vp15-dsRNA 抑制了WSSV 增殖第59页
     ·vp15-dsRNA 影响了病毒粒子的装配第59-61页
 4 讨论第61-63页
第二部分 核衣壳蛋白 VP15 降解现象的初步研究第63-70页
 1 前言第63页
 2 材料与方法第63-64页
   ·材料第63页
   ·方法第63-64页
     ·VP15 和FITC-VP15 透析第63页
     ·VP15 不同pH 透析第63页
     ·DNA 对VP15 降解的影响第63-64页
     ·蛋白酶抑制剂、EDTA 或者加热对VP15 降解的影响第64页
     ·VP15 与其他蛋白混合后透析分析第64页
 3 结果第64-68页
   ·FITC 标记对VP15 降解的影响第64-65页
   ·不同pH 对VP15 降解的影响第65-66页
   ·DNA 对VP15 降解的影响第66页
   ·蛋白酶抑制剂、EDTA 以及加热对VP15 降解的影响第66-67页
   ·VP15 与其他蛋白混合后透析分析第67-68页
 4 讨论第68-70页
第三部分 对虾白斑综合症病毒核衣壳衣壳粒的初步研究第70-82页
 1 前言第70-71页
 2 材料与方法第71-72页
   ·材料第71页
   ·方法第71-72页
     ·不同试剂处理核衣壳第71页
     ·透射电子显微镜分析第71页
     ·尿素浓度梯度处理核衣壳第71-72页
 3 结果第72-80页
   ·核衣壳酸碱耐受性研究第72-74页
   ·蛋白变性剂(尿素、盐酸胍)可使核衣壳解聚第74-78页
   ·核衣壳分子间作用力为二硫键第78-80页
 4 讨论第80-82页
参考文献第82-95页
致谢第95页

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