| 摘要 | 第3-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 前言 | 第22-27页 |
| 第一部分 MIR-145沉默与过表达慢病毒表达载体的构建及鉴定 | 第27-46页 |
| 引言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-38页 |
| 1.1 动物来源 | 第27-28页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第28页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第29-31页 |
| 1.5 miR-145序列设计 | 第31页 |
| 1.6 沉默和过表达载体 | 第31页 |
| 1.7 获得双链DNA | 第31页 |
| 1.8 目的载体片段的回收 | 第31-32页 |
| 1.9 酶切后载体和退火oligo连接 | 第32页 |
| 1.10 连接产物的转化 | 第32页 |
| 1.11 克隆的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| 1.12 慢病毒包装 | 第33-34页 |
| 1.13 慢病毒滴度测定 | 第34-35页 |
| 1.14 大鼠CCSMC原代培养及鉴定 | 第35-36页 |
| 1.15 细胞形态学观察倒置显微镜下观察细胞大小、形态和生长特点等 | 第36页 |
| 1.16 SMA免疫荧光染色 | 第36页 |
| 1.17 沉默和过表达稳定细胞株的构建 | 第36-37页 |
| 1.18 RT-PCR检测慢病毒感染CCSMC后miR-145表达情况 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| 2.1 大鼠CCSMC原代培养及鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2 沉默和过表达miR-145稳定细胞株的建立 | 第39页 |
| 2.3 慢病毒感染CCSMC后miR-145的表达情况 | 第39-42页 |
| 3、讨论 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| 第二部分 MIR-145对体外培养的大鼠CCSMCS的表型转化和增殖的影响 | 第46-67页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-55页 |
| 1.1 实验试剂 | 第47页 |
| 1.2 实验仪器 | 第47-48页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第48-49页 |
| 1.4 大鼠CCSMC的原代培养见第一部分 | 第49页 |
| 1.5 实验分组 | 第49页 |
| 1.6 MTS法检测细胞增殖能力 | 第49-50页 |
| 1.7 流式细胞术检测细胞周期 | 第50页 |
| 1.8 细胞划痕实验检测细胞的迁移能力 | 第50-51页 |
| 1.9 PCR检测表型标志物mRNA水平变化情况 | 第51-53页 |
| 1.10 Western blot检测表型标志物蛋白水平变化情况 | 第53-55页 |
| 2 结果 | 第55-62页 |
| 2.1 MTS检测miR-145对细胞增殖的影响 | 第55页 |
| 2.2 流式细胞仪检测miR-145对细胞周期的影响 | 第55-56页 |
| 2.3 划痕实验检测miR-145对细胞迁移能力的影响 | 第56页 |
| 2.4 RT-PCR检测miR-145对细胞表型标志物的影响 | 第56页 |
| 2.5 Western blot检测miR-145对细胞表型标志物的影响 | 第56-57页 |
| 2.6 附图 | 第57-62页 |
| 3、讨论 | 第62-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第三部分 MIR-145在体内对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌表型转化和勃起功能的影响 | 第67-89页 |
| 引言 | 第67-68页 |
| 1 材料与方法 | 第68-79页 |
| 1.1 动物来源 | 第68页 |
| 1.2 实验试剂 | 第68-69页 |
| 1.3 实验仪器 | 第69-70页 |
| 1.4 溶液配制 | 第70页 |
| 1.5 大鼠模型建立 | 第70-71页 |
| 1.6、阴茎海绵体穿刺法测定阴茎海绵体内压(INTRACAVERNOUS PRESSURE,ICP) | 第71-72页 |
| 1.6.1 分离阴茎海绵体神经及阴茎体中部穿刺 | 第71-72页 |
| 1.6.2 ICP测定 | 第72页 |
| 1.6.3 平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)测压 | 第72页 |
| 1.7 免疫组化 | 第72-74页 |
| 1.8 RT-PCR | 第74-76页 |
| 1.9 WESTERN BLOT | 第76-79页 |
| 2 结果 | 第79-84页 |
| 2.1 沉默miR-145对大鼠阴茎勃起功能的影响 | 第79页 |
| 2.2 免疫组化检测沉默miR-145对大鼠阴茎海绵体平滑肌荧光蛋白和表型标志物表达的影响 | 第79页 |
| 2.3 RT-PCR检测沉默miR-145对大鼠阴茎海绵体平滑肌表型标志物mRNA表达的影响 | 第79页 |
| 2.4 Western blot检测沉默miR-145对大鼠阴茎海绵体平滑肌表型标志物蛋白表达的影响 | 第79-80页 |
| 2.5 附图 | 第80-84页 |
| 3、讨论 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 综述 | 第90-111页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 缩写词简表 | 第111-113页 |
| 博士研究生期间发表论文及参加课题情况 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
