| 缩略词 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 实验技术路线 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 MC3R基因研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1.1 MC3R基因简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 猪MC3R基因结构与蛋白结构 | 第13-15页 |
| 1.1.3 MC3R基因功能 | 第15-20页 |
| 1.2 基因编辑技术研究进展 | 第20-28页 |
| 1.2.1 基因编辑技术简介 | 第20页 |
| 1.2.2 同源重组 | 第20-22页 |
| 1.2.3 锌指蛋白核酸酶 | 第22-23页 |
| 1.2.4 转录激活因子样效应物核酸酶 | 第23-25页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9系统 | 第25-28页 |
| 1.3 基因编辑技术在大动物中的应用 | 第28-30页 |
| 1.4 本论文选题依据和主要工作 | 第30-32页 |
| 1.4.1 本课题选题依据和意义 | 第30-31页 |
| 1.4.2 主要工作内容 | 第31-32页 |
| 第二章 MC3R基因敲除载体构建 | 第32-47页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 实验内容 | 第32-40页 |
| 2.2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.2 常用试剂配制 | 第33页 |
| 2.2.3 MC3R基因测序 | 第33-36页 |
| 2.2.4 MC3R-Cas9打靶载体构建 | 第36-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-47页 |
| 2.3.1 MC3R基因测序结果 | 第40-43页 |
| 2.3.2 MC3R-Cas9打靶载体构建 | 第43-46页 |
| 2.3.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 中国实验用小型猪胎儿成纤维细胞系建立 | 第47-51页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 实验内容 | 第47-49页 |
| 3.2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第47页 |
| 3.2.2 常用试剂配制 | 第47-48页 |
| 3.2.3 猪胎儿成纤维细胞系原代培养 | 第48页 |
| 3.2.4 猪胎儿成纤维细胞系冻存 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.3.1 胎儿成纤维细胞系建立 | 第49-50页 |
| 3.3.2 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 MC3R敲除载体转染及切割效率验证 | 第51-61页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 实验内容 | 第51-57页 |
| 4.2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第51-52页 |
| 4.2.2 常用试剂配制 | 第52页 |
| 4.2.3 细胞解冻和传代培养 | 第52-53页 |
| 4.2.4 细胞转染及培养 | 第53页 |
| 4.2.5 观察荧光计算电击转染效率 | 第53页 |
| 4.2.6 提取基因组酶切计算靶点切割效率 | 第53-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-61页 |
| 4.3.1 电击转染效率 | 第57-58页 |
| 4.3.2 靶点切割效率 | 第58-60页 |
| 4.3.3 讨论 | 第60-61页 |
| 第五章 MC3R基因敲除细胞筛选 | 第61-69页 |
| 5.1 前言 | 第61页 |
| 5.2 实验内容 | 第61-65页 |
| 5.2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第61页 |
| 5.2.2 常用试剂配制 | 第61-62页 |
| 5.2.3 细胞解冻和传代 | 第62页 |
| 5.2.4 胎儿成纤维细胞系转染、筛选以及阳性细胞克隆点鉴定 | 第62-65页 |
| 5.2.5 阳性细胞克隆点冻存 | 第65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-69页 |
| 5.3.1 阳性克隆点鉴定结果及冻存 | 第65-68页 |
| 5.3.2 讨论 | 第68-69页 |
| 第六章 利用体细胞核移植技术制备MC3R基因敲除猪 | 第69-77页 |
| 6.1 前言 | 第69页 |
| 6.2 实验内容 | 第69-74页 |
| 6.2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第69页 |
| 6.2.2 常用试剂配制 | 第69-70页 |
| 6.2.3 供体细胞解冻培养 | 第70页 |
| 6.2.4 猪卵细胞体外成熟培养 | 第70-71页 |
| 6.2.5 体细胞核移植 | 第71-73页 |
| 6.2.6 克隆胚胎移植 | 第73页 |
| 6.2.7 受孕母猪产仔以及鉴定 | 第73-74页 |
| 6.3 结果与分析 | 第74-77页 |
| 6.3.1 克隆猪的鉴定 | 第74-76页 |
| 6.3.2 讨论 | 第76-77页 |
| 第七章 结论与创新点 | 第77-79页 |
| 7.1 结论 | 第77页 |
| 7.2 创新点 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-93页 |
| 附录 1. 猪MC3R基因mRNA信息 | 第90-92页 |
| 附录 2. 中国实验用小型猪MC3R基因组序列信息 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
