| 符号说明 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 酚氧化酶研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 酚氧化酶简介 | 第12页 |
| 1.1.2 酚氧化酶的功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 酚氧化酶抑制剂的研究 | 第13页 |
| 1.1.4 酚氧化酶的分子生物学研究 | 第13-14页 |
| 1.2 球孢白僵菌研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 球孢白僵菌简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 球孢白僵菌的致病机理研究 | 第15页 |
| 1.2.3 球孢白僵菌在生防领域的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 槲皮素研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 小菜蛾的发生及危害 | 第16页 |
| 1.3.2 槲皮素简介 | 第16-17页 |
| 1.4 Western blot简介 | 第17-18页 |
| 1.5 选题目的和意义 | 第18-20页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 试剂仪器及设备 | 第21-23页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 2.2 序列分析及基因合成 | 第23页 |
| 2.2.1 序列分析 | 第23页 |
| 2.2.2 基因合成 | 第23页 |
| 2.3 P_xPPO1、P_xPPO2原核表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.3.1 pET-30a菌种的培养 | 第23页 |
| 2.3.2 抽提质粒DNA | 第23-24页 |
| 2.3.3 酶切反应体系 | 第24-25页 |
| 2.3.4 连接反应体系 | 第25页 |
| 2.3.5 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3.6 转化重组DNA | 第25-26页 |
| 2.4 蛋白表达和纯化 | 第26-27页 |
| 2.4.1 实验试剂配置 | 第26页 |
| 2.4.2 蛋白表达及纯化 | 第26-27页 |
| 2.5 免疫以及血清制备 | 第27-28页 |
| 2.6 抗原亲和纯化以及抗体鉴定 | 第28-29页 |
| 2.6.1 交联 | 第28页 |
| 2.6.2 结合 | 第28页 |
| 2.6.3 洗脱 | 第28-29页 |
| 2.7 试虫的饲养及处理 | 第29页 |
| 2.7.1 试虫饲养 | 第29页 |
| 2.7.2 微量点滴法 | 第29页 |
| 2.8 试虫总蛋白的提取及浓度标定 | 第29-31页 |
| 2.8.1 总蛋白的提取 | 第29-30页 |
| 2.8.2 蛋白浓度的标定 | 第30-31页 |
| 2.9 SDS-PAGE电泳 | 第31-32页 |
| 2.9.1 凝胶制备 | 第31-32页 |
| 2.9.2 上样 | 第32页 |
| 2.9.3 电泳 | 第32页 |
| 2.10 蛋白质印迹Weste Blot | 第32-33页 |
| 2.10.1 转膜 | 第32-33页 |
| 2.10.2 免疫反应 | 第33页 |
| 2.10.3 ECL发光显影 | 第33页 |
| 2.11 ECL曝光信号分析 | 第33-34页 |
| 2.12 槲皮素处理 | 第34页 |
| 2.13 球孢白僵菌处理 | 第34-35页 |
| 2.13.1 球孢白僵菌活化 | 第34页 |
| 2.13.2 球孢白僵菌侵染试虫 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 序列分析 | 第35页 |
| 3.2 基因合成 | 第35-37页 |
| 3.2.1 P_xPPO1基因合成测序 | 第35-36页 |
| 3.2.2 P_xPPO2基因合成测序 | 第36-37页 |
| 3.3 重组载体构建及测序分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 P_xPPO1重组质粒 | 第37-38页 |
| 3.3.2 P_xPPO2重组质粒 | 第38-39页 |
| 3.4 蛋白表达和纯化 | 第39-40页 |
| 3.4.1 PPO1重组质粒转化 | 第39页 |
| 3.4.2 PPO2重组质粒转化 | 第39-40页 |
| 3.5 抗体鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.5.1 PPO1抗体鉴定 | 第40页 |
| 3.5.2 PPO2抗体鉴定 | 第40-41页 |
| 3.6 ECL曝光信号分析 | 第41-42页 |
| 3.6.1 内参基因β-actin曝光信号分析 | 第41页 |
| 3.6.2 目的蛋白PPO1、PPO2曝光信号分析 | 第41-42页 |
| 3.7 槲皮素处理后PO蛋白相对表达量 | 第42-49页 |
| 3.7.1 蛋白浓度的测定 | 第42页 |
| 3.7.2 槲皮素处理PPO1蛋白相对表达量变化 | 第42-45页 |
| 3.7.3 槲皮素处理小菜蛾3龄幼虫P_xPPO1翻译表达结果 | 第45页 |
| 3.7.4 槲皮素处理PPO2蛋白相对表达量变化 | 第45-48页 |
| 3.7.5 槲皮素处理小菜蛾3龄幼虫P_xPPO2翻译表达结果 | 第48-49页 |
| 3.8 球孢白僵菌侵染后PO蛋白相对表达量 | 第49-51页 |
| 3.8.1 蛋白浓度的测定 | 第49页 |
| 3.8.2 球孢白僵菌侵染后PPO蛋白相对表达量变化 | 第49-50页 |
| 3.8.3 球孢白僵菌侵染翻译表达结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 序列分析 | 第51页 |
| 4.2 槲皮素处理小菜蛾3龄幼虫P_xPPO1、P_xPPO2翻译表达量 | 第51页 |
| 4.3 球孢白僵菌侵染小菜蛾3龄幼虫P_xPPO1、P_xPPO2翻译表达量 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 6 附图 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第67页 |
