| 致谢 | 第1-13页 |
| 缩写词 | 第13-15页 |
| 氨基酸简写符号 | 第15-16页 |
| 摘要 | 第16-18页 |
| Abstract | 第18-20页 |
| 0 引言 | 第20-22页 |
| 1 文献综述 | 第22-36页 |
| ·植物雌蕊发育的分子遗传研究进展 | 第22-27页 |
| ·雌配子体的发育 | 第23-24页 |
| ·大孢子囊及大孢子的发生 | 第23-24页 |
| ·雌配子体的形成 | 第24页 |
| ·植物雌蕊发育分子遗传机制的研究 | 第24-25页 |
| ·花器官发育的ABCDE模型 | 第24页 |
| ·心皮的个体发生学说 | 第24-25页 |
| ·与植物雌蕊发育相关的基因 | 第25-26页 |
| ·NAC2 | 第25页 |
| ·KNOX | 第25页 |
| ·WUS | 第25页 |
| ·CLAVATA | 第25-26页 |
| ·MGO | 第26页 |
| ·CRC | 第26页 |
| ·ScPIP2a | 第26页 |
| ·植物雌蕊发生的基因网络 | 第26-27页 |
| ·植物胚珠发育 | 第27-32页 |
| ·胚珠的发育 | 第28-29页 |
| ·胚珠特征基因 | 第29-31页 |
| ·珠被发育相关基因 | 第31页 |
| ·胚囊发育相关基因 | 第31-32页 |
| ·胚珠发育模式 | 第32页 |
| ·NAC转录因子的研究进展 | 第32-36页 |
| ·与植物生长及发育相关的NAC | 第32-34页 |
| ·参与顶端分生组织发生及花器官发育 | 第32-33页 |
| ·参与植物器官的衰老 | 第33页 |
| ·参与侧根的形成 | 第33页 |
| ·参与次生壁的增厚 | 第33-34页 |
| ·参与细胞周期的调控 | 第34页 |
| ·与胁迫响应相关的NAC | 第34-35页 |
| ·参与生物胁迫反应 | 第34页 |
| ·参与非生物胁迫反应 | 第34-35页 |
| ·miRNAs调控NAC的表达 | 第35页 |
| ·NAC转录因子蛋白水平的调控 | 第35-36页 |
| 2 芜菁BcNAC2的分离及其序列分析 | 第36-66页 |
| ·材料与方法 | 第37-48页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第37页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·总RNA的检测 | 第39页 |
| ·cDNA的合成 | 第39-41页 |
| ·采用Clonetech公司试剂盒方法合成cDNA | 第39-41页 |
| ·采用TaKaRa试剂盒的方法合成cDNA一链 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌DH 5α感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌TG1感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·LB培养基的配制 | 第42页 |
| ·cDNA和DNA测序 | 第42-44页 |
| ·BcNAC2基因cDNA序列全长的扩增 | 第44-45页 |
| ·cDNA编码区的获得 | 第44页 |
| ·cDNA非编码区的获得 | 第44-45页 |
| ·BcNAC2基因DNA序列全长的扩增 | 第45-48页 |
| ·芜菁BcNAC2全长序列的特征分析 | 第48页 |
| ·芜菁BcNAC2蛋白结构域与拟南芥NAC2蛋白结构域的比较 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-64页 |
| ·总RNA的提取与cDNA的合成 | 第48页 |
| ·BcNAC2 cDNA全长的获得 | 第48-52页 |
| ·BcNAC2 DNA全长的获得 | 第52页 |
| ·BcNAC2核苷酸序列分析 | 第52-61页 |
| ·NAC基因同源比对及进化树分析 | 第61页 |
| ·BcNAC2与AtNAC2结构域的比较 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·芜菁BcNAC2全长序列的结构特征分析 | 第64页 |
| ·芜菁BcNAC2的功能预测 | 第64-66页 |
| 3 芜菁BcNAC2基因的表达分析 | 第66-75页 |
| ·材料与方法 | 第67-72页 |
| ·半定量RT-PCR分析的实验材料与方法 | 第67页 |
| ·半定量RT-PCR的实验材料 | 第67页 |
| ·半定量RT-PCR的引物设计 | 第67页 |
| ·半定量RT-PCR的体系及程序 | 第67页 |
| ·组织原位杂交分析的实验材料与方法 | 第67-72页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第68-69页 |
| ·材料固定、包埋和制片 | 第69-71页 |
| ·地高辛标记RNA探针 | 第71页 |
| ·原位杂交步骤 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR分析 | 第72页 |
| ·组织原位杂交分析 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·RT-PCR分析BcNAC2在胚或种子发育中起作用 | 第73页 |
| ·组织原位杂交分析BcNAC2在胚珠发育过程中起作用 | 第73-75页 |
| 4 芜菁BcNAC2的反义载体构建及对菜心的遗传转化 | 第75-91页 |
| ·芜菁BcNAC2的反义载体构建 | 第75-79页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·反义片段的获得 | 第75-77页 |
| ·质粒的提取 | 第77-78页 |
| ·芜菁BcNAC2反义表达载体的构建 | 第78页 |
| ·反义片段及pBI121的制备 | 第78页 |
| ·表达质粒的构建 | 第78页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第78-79页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第78-79页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第79页 |
| ·农杆菌中质粒鉴定 | 第79页 |
| ·反义表达载体对菜心的遗传转化 | 第79-83页 |
| ·构建载体用菜心作为材料的依据 | 第79-80页 |
| ·植物材料、菌株及抗生素 | 第80页 |
| ·菜心的遗传转化体系 | 第80-81页 |
| ·反义表达载体对菜心的遗传转化步骤 | 第81-83页 |
| ·菜心转BcNAC2反义基因芽系的分子检测 | 第83页 |
| ·菜心转BcNAC2反义基因芽系基因组DNA的提取 | 第83页 |
| ·菜心转BcNAC2反义基因芽系的PCR检测 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-89页 |
| ·芜菁BcNAC2基因反义片段的获得 | 第83-84页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第84-86页 |
| ·反义表达载体农杆菌中质粒的鉴定 | 第86-87页 |
| ·菜心可以取代芜菁进行遗传转化 | 第87页 |
| ·菜心转BcNAC2反义基因芽系的获得 | 第87-88页 |
| ·菜心转BcNAC2反义基因芽系的分子检测 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| ·反义技术在基因功能研究中的高效性 | 第89-90页 |
| ·BcNAC2反义转化抗性芽的分子检测 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第100页 |
