| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-20页 |
| ·猪肺炎支原体概况 | 第14-16页 |
| ·病原学特征 | 第14页 |
| ·猪肺炎支原体致病机理 | 第14-15页 |
| ·猪肺炎支原体主要抗原的研究 | 第15-16页 |
| ·生物信息学技术概况 | 第16-20页 |
| ·反向疫苗学研究方法 | 第17页 |
| ·反向疫苗学在猪支原体肺炎疫苗研究中的应用 | 第17-20页 |
| 第2章 引言 | 第20-22页 |
| 第3章 猪肺炎支原体部分候选抗原蛋白的生物信息学预测与分析 | 第22-30页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| ·结果 | 第23-27页 |
| ·mhp168_116、mhp_168_322、mhp_168_341和mhp_168_549基因核苷酸序列分析 | 第23-24页 |
| ·预测Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_549的信号肽 | 第24-25页 |
| ·DAS软件预测Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_549的结果 | 第25-26页 |
| ·HMHMM软件预测Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_ 549的结果 | 第26页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_549亚细胞定位预测 | 第26-27页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_549的β-桶状结构预测 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-30页 |
| ·筛选Mhp免疫优势抗原蛋白的必要性 | 第27-28页 |
| ·高通量免疫优势抗原组学 | 第28页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341和Mhp168_549蛋白氨基酸序列分析 | 第28页 |
| ·生物信息学软件预测结果 | 第28-30页 |
| 第4章 非TGA编码Trp猪肺炎支原体mhp168_116、mhp168_341、mhp168_549基因的原核表达及纯化 | 第30-48页 |
| ·实验材料 | 第30-33页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·载体 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·菌株的培养 | 第33页 |
| ·猪肺炎支原体168株DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增mhp168-116、mhp168-341和mhp168-549基因片段 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_116、pGEX-6P-2-mhp168_341和pGEX-6P-2-mhp168_549的构建 | 第36-38页 |
| ·基因碱基序列测定 | 第38页 |
| ·重组质粒在E.coli XL-1中的表达 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-43页 |
| ·mhp168_116、mhp168_341和mhp168_549基因PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_116、pGEX-6P-2-mhpl68_341和pGEX-6P-2-mhp168_549酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列测定 | 第41页 |
| ·mhp168_116、mhp168_341和mhp168_549基因的原核表达与纯化 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-48页 |
| ·克隆表达Mhp168_116、Mhp168_341和Mhp168_549蛋白的意义 | 第43页 |
| ·mhp168_116、mhp168_341和mhp168_549目的基因的选择 | 第43-44页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第44页 |
| ·蛋白表达系统 | 第44-46页 |
| ·GST标签的切除 | 第46页 |
| ·后继实验 | 第46-48页 |
| 第5章 TGA编码Trp猪肺炎支原体mhp168_322基因的原核表达及纯化 | 第48-62页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·菌株的培养 | 第48页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·PCR扩增mhp168_322基因片段 | 第48-49页 |
| ·PCR产物的保护性碱基的酶切 | 第49页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322的构建 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322基因碱基序列测定 | 第50页 |
| ·对重组质粒pMD19-T-mhp168_322进行点突变 | 第50-52页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_322的构建 | 第52页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_322基因碱基序列测定 | 第52页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_322在E.coli XL-1中的表达 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-59页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322-1的构建 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322-2的构建 | 第54-56页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322-3的构建 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pMD19-T-mhp168_322-4的构建 | 第57-58页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-2-mhp168_322的构建 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE检测Mhp168_322蛋白的表达与纯化 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| ·mhp168_322基因突变的意义 | 第59页 |
| ·突变方法的选择 | 第59-60页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第60-62页 |
| 第6章 Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341、Mhp168_549蛋白的免疫原性和反应原性分析 | 第62-70页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·实验动物 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhpl68_341、Mhp168_549蛋白抗血清的制备 | 第63页 |
| ·Westemblotting检测目的蛋白的免疫原性 | 第63-64页 |
| ·间接ELISA试验 | 第64页 |
| ·猪阳性血清Western blotting分析目的蛋白反应原性 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-68页 |
| ·Westernblotting检测目的蛋白的免疫原性 | 第64-66页 |
| ·间接ELISA试验结果 | 第66-67页 |
| ·猪阳性血清Western blotting分析重组蛋白反应原性结果 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341、Mhp168_549蛋白免疫原性和反应原性分析 | 第68-69页 |
| ·间接ELISA法检测Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341、Mhp168_ 549蛋白的免疫原性 | 第69-70页 |
| 第7章 全文总结 | 第70-72页 |
| ·猪肺炎支原体168株部分分泌蛋白和外膜蛋白的生物信息学分析 | 第70页 |
| ·非TGA编码Trp猪肺炎支原体mhp168_116、mhp168_341和mhp168_549的克隆表达与纯化 | 第70页 |
| ·TGA编码Trp猪肺炎支原体mhp168_322的克隆表达与纯化 | 第70页 |
| ·PP酶酶切 | 第70页 |
| ·Mhp168_116、Mhp168_322、Mhp168_341、Mhp168_549蛋白的免疫原性和反应原性分析 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附表 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
