| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-32页 |
| ·Curli纤维的特征 | 第16-17页 |
| ·Curli纤维亚基的表达调控网络 | 第17-19页 |
| ·Curli系统中亚基的特点 | 第19-24页 |
| ·CsgD蛋白 | 第20页 |
| ·CsgA蛋白 | 第20-21页 |
| ·CsgB蛋白 | 第21页 |
| ·CsgC蛋白 | 第21-23页 |
| ·CsgG蛋白 | 第23页 |
| ·CsgE蛋白 | 第23页 |
| ·CsgE蛋白 | 第23-24页 |
| ·Curli纤维组装过程的调控 | 第24-29页 |
| ·Pre-pore状态下的CsgG | 第24-26页 |
| ·脂溶性下全长的CsgG | 第26页 |
| ·CsgG与外膜外侧区域结构与功能 | 第26-27页 |
| ·CsgG与周质侧区域的结构与功能 | 第27页 |
| ·Curli亚基分泌的机制假设 | 第27-29页 |
| ·目前存在的问题及争论 | 第29页 |
| ·本研究的意义、主要内容和技术路线 | 第29-32页 |
| ·本研究的意义 | 第29-30页 |
| ·主要研究内容 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 Curli分泌途径中关键基因csgF的克隆、表达和纯化研究 | 第32-52页 |
| ·材料与仪器 | 第32-34页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·载体和菌株 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·csgF基因的生物信息学分析 | 第34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·总DNA提取 | 第34-35页 |
| ·基因组DNA质量浓度检测 | 第35页 |
| ·PCR扩增csgF基因不同片段 | 第35-36页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第36-37页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·重组质粒验证 | 第38-40页 |
| ·CsgF蛋白的表达 | 第40页 |
| ·CsgF蛋白纯化条件及优化 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·大肠杆菌CFT073总DNA提取结果 | 第41页 |
| ·CsgF生物信息学分析和PCR扩增产物结果1 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增产物电泳结果 | 第43页 |
| ·重组质粒验证 | 第43-45页 |
| ·CsgF蛋白表达 | 第45-46页 |
| ·CsgF蛋白的聚集状态 | 第46页 |
| ·CsgF蛋白纯化条件的优化 | 第46-50页 |
| ·小结与讨论 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第三章 Curli分泌途径中重要基因csgE基因的克隆、表达和纯化 | 第52-66页 |
| ·材料与仪器 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·载体和菌株 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-60页 |
| ·csgE基因生物信息学分析 | 第53-54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·模板的制备 | 第54-55页 |
| ·基因组DNA质量浓度检测 | 第55页 |
| ·csgE基因克隆与测序 | 第55页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第55-56页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第56-57页 |
| ·转化 | 第57-58页 |
| ·重组质粒验证 | 第58-59页 |
| ·CsgE蛋白的表达和纯化 | 第59-60页 |
| ·CsgE蛋白聚集状态分析 | 第60页 |
| ·CsgE纯化条件的优化 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-65页 |
| ·模板的制备 | 第60页 |
| ·csgE基因的生物信息学分析及克隆 | 第60-62页 |
| ·重组质粒的验证 | 第62-63页 |
| ·CsgE蛋白的表达及纯化 | 第63-64页 |
| ·纯化条件的优化结果 | 第64-65页 |
| ·小结与讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第四章 Curli分泌途径中重要基因csgG的克隆表达和纯化 | 第66-79页 |
| ·材料与仪器 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第66-67页 |
| ·载体和菌株 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-75页 |
| ·csgG基因的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| ·引物设计 | 第68页 |
| ·总DNA提取 | 第68-69页 |
| ·基因组DNA质量浓度检测 | 第69页 |
| ·PCR扩增csgG基因 | 第69页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第69-70页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第70-71页 |
| ·转化 | 第71-72页 |
| ·重组质粒验证 | 第72-73页 |
| ·CsgG蛋白的表达纯化 | 第73-74页 |
| ·CsgG蛋白聚集分析 | 第74-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-77页 |
| ·csgG基因生物信息学分析 | 第75页 |
| ·csgG基因PCR扩增 | 第75页 |
| ·重组质粒表达 | 第75-76页 |
| ·CsgG蛋白的表达纯化 | 第76-77页 |
| ·小结与讨论 | 第77-79页 |
| ·小结 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 CsgF和CsgE蛋白的结晶分析 | 第79-87页 |
| ·主要的试剂与仪器 | 第79页 |
| ·试剂与耗材 | 第79页 |
| ·主要的仪器和数据分析软件 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·蛋白质晶体学基本原理 | 第80-81页 |
| ·CsgF和CsgE蛋白的晶体生长和优化 | 第81页 |
| ·晶体X射线衍射和数据收集 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-85页 |
| ·CsgE和CsgE晶体初筛蛋白浓度 | 第82页 |
| ·CsgE结晶与条件优化 | 第82-83页 |
| ·CsgE蛋白晶体数据收集与处理 | 第83-85页 |
| ·小结与讨论 | 第85-87页 |
| ·小结 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 CsgE、CsgF蛋白与CsgG互作功能研究 | 第87-104页 |
| ·试验材料与仪器设备 | 第87-88页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·主要仪器 | 第88页 |
| ·试验方法 | 第88-93页 |
| ·CsgE、CsgF蛋白与CsgG蛋白互作关系预测 | 第88页 |
| ·CsgE与CsgG融合表达 | 第88-91页 |
| ·重组质粒的构建与酶切 | 第91页 |
| ·CsgE与CsgG融合重组质粒测序 | 第91页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第91-92页 |
| ·融合蛋白的聚集状态分析 | 第92页 |
| ·融合蛋白的纯化条件的探索 | 第92页 |
| ·融合蛋白正确折叠分析 | 第92-93页 |
| ·CsgE与CsgG互作pull down试验 | 第93页 |
| ·CsgF与CsgG互作Pull down试验分析 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-102页 |
| ·csgE和csgG基因融合表达基因的克隆 | 第94-95页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第95页 |
| ·融合蛋白表达结果和鉴定 | 第95-96页 |
| ·融合蛋白聚集状态的分析 | 第96-97页 |
| ·融合蛋白纯化条件的优化 | 第97-99页 |
| ·融合蛋白正确折叠分析 | 第99页 |
| ·CsgE与CsgG蛋白Pull down试验 | 第99-100页 |
| ·CsgF与CsgG蛋白pull down试验 | 第100-102页 |
| ·小结与讨论 | 第102-104页 |
| ·小结 | 第102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| 第七章 总结与创新 | 第104-106页 |
| ·结论 | 第104页 |
| ·创新点 | 第104-105页 |
| ·研究展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 附录A 部分药品配制方法 | 第114-116页 |
| 附录B 表达载体图谱 | 第116-117页 |
| 附录C: 硕士期间的主要学术成果 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
