| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1. 引言 | 第10-19页 |
| ·文心兰简介 | 第10-11页 |
| ·乙烯的生理作用及与切花衰老的关系 | 第11-13页 |
| ·乙烯的生理作用 | 第11-12页 |
| ·乙烯与切花衰老 | 第12-13页 |
| ·乙烯的生物合成及基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| ·乙烯合成研究 | 第13-14页 |
| ·乙烯合成的基因工程研究 | 第14-15页 |
| ·乙烯信号转导基因及其研究情况 | 第15-18页 |
| ·乙烯信号转导相关基因 | 第15-16页 |
| ·乙烯信号转导基因研究情况 | 第16-18页 |
| ·研究内容及目的意义 | 第18-19页 |
| ·研究意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 2 实验材料与所需仪器 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 3 实验方法与步骤 | 第20-37页 |
| ·文心兰总RNA的提取及cDNA的合成 | 第20-22页 |
| ·文心兰总RNA的提取(CTAB-LiCl法) | 第20-21页 |
| ·cDNA的合成 | 第21页 |
| ·cDNA质量检测 | 第21-22页 |
| ·文心兰OnACO2(ACC氧化酶)基因及OnERS1(乙烯受体)基因的克隆 | 第22-30页 |
| ·克隆OnACO2与OnERS1基因中间片段 | 第22-25页 |
| ·On-CO2与OnERS1基因3’端克隆 | 第25-26页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因5’末端序列扩增 | 第26-28页 |
| ·OnACO2与OnERS1全长cDNA的扩增 | 第28-29页 |
| ·利用生物信息学软件对OnACO2与OnERS1基因进行分析 | 第29-30页 |
| ·OnACO2基因的原核表达 | 第30-34页 |
| ·OnACO2基因ORF区的扩增 | 第30页 |
| ·提取质粒PMD-ACO2和pet-28a | 第30-31页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒Pet-ACO2的转化及鉴定 | 第32页 |
| ·诱导表达条件的筛选 | 第32-33页 |
| ·菌液总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·ACC氧化酶的粗提及酶活性测定 | 第34页 |
| ·O nACO2与OnERS1基因的表达分析 | 第34-37页 |
| ·文心兰切花衰老过程中乙烯释放速率的测定 | 第34-35页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因的表达分析 | 第35-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-59页 |
| ·文心兰总RNA提取结果 | 第37页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因全长的克隆 | 第37-43页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因中间片段的获得 | 第37-38页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因3’端序列的获得 | 第38-39页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因5’端序列的获得 | 第39页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因全长序列的获得 | 第39-43页 |
| ·OnACO2与OnERS1的生物信息学分析 | 第43-52页 |
| ·OnACO2的生物信息学分析 | 第43-47页 |
| ·OnERS1的生物信息学分析 | 第47-52页 |
| ·文心兰OnACO2基因的原核表达 | 第52-55页 |
| ·原核表达载体构建及产物分析 | 第52-53页 |
| ·ACC氧化酶活性的测定 | 第53-55页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因的表达特征分析 | 第55-59页 |
| ·瓶插期间文心兰切花花朵各组织中乙烯释放状况 | 第55页 |
| ·相对荧光定量分析OnACO2基因的表达量 | 第55-57页 |
| ·相对荧光定量分析OnERS1基因的表达量 | 第57-59页 |
| 5 讨论与总结 | 第59-65页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因的特征分析 | 第59-60页 |
| ·OnACO2基因的原核表达分析 | 第60-61页 |
| ·OnACO2与OnERS1基因表达分析 | 第61-63页 |
| ·荧光定量PCR引物的特异性及扩增效率分析 | 第61页 |
| ·文心兰切花衰老、乙烯释放和OnACO2基因表达的相关性 | 第61-62页 |
| ·文心兰切花衰老、乙烯释放和OnERS1基因表达的相关性 | 第62-63页 |
| ·总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 英文缩写词表(List of abbreviation) | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
