| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 第一节 选题依据、目的和意义 | 第11-12页 |
| 第二节 国内外研究进展 | 第12-21页 |
| 一、植物生物钟研究进展 | 第12-15页 |
| 二、大豆开花调控途径 | 第15-17页 |
| 三、亚细胞定位技术 | 第17-18页 |
| 四、大豆遗传转化技术 | 第18-19页 |
| 五、CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-41页 |
| 第一节 试验材料 | 第21-22页 |
| 一、植物材料 | 第21-22页 |
| （一）载体和菌株 | 第21页 |
| （二）主要试剂 | 第21-22页 |
| 第二节 试验方法 | 第22-41页 |
| 一、Gm ELF4候选基因的获得 | 第22-26页 |
| （一）提取Corsoy和Kitamishiro植株RNA | 第22-23页 |
| （二）合成c DNA | 第23页 |
| （三）Gm ELF4候选基因克隆 | 第23-24页 |
| （四）凝胶回收目的DNA片段 | 第24-25页 |
| （五）目的片段连接T载体 | 第25页 |
| （六）连接产物转化Trans-T1感受态细胞 | 第25页 |
| （七）菌落PCR检测重组质粒 | 第25-26页 |
| （八）质粒提取 | 第26页 |
| 二、Gm ELF4基因及其相关基因的表达分析 | 第26-28页 |
| （一）大豆植物材料处理 | 第26-27页 |
| （二）荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 三、Gm ELF4基因亚细胞定位 | 第28-30页 |
| （一）相关溶液 | 第28-29页 |
| （二）拟南芥原生质体转化 | 第29-30页 |
| 四、大豆遗传转化载体构建 | 第30-33页 |
| （一）目的片段的制备 | 第30-31页 |
| （二）大豆遗传转化载体的制备 | 第31页 |
| （三）目的片段连接大豆遗传转化载体 | 第31页 |
| （四）农杆菌EHA101热激感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| （五）重组质粒转化至EHA101感受态细胞 | 第32页 |
| （六）菌落PCR检测 | 第32页 |
| （七）双酶切检验重组载体 | 第32-33页 |
| 五、CRISPR/Cas9载体构建 | 第33-36页 |
| 六、大豆遗传转化 | 第36-41页 |
| （一）相关培养基 | 第36-38页 |
| （二）根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第38-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-53页 |
| 第一节 Gm ELF4候选基因的克隆 | 第41-44页 |
| 第二节 Gm ELF4基因的表达模式分析 | 第44-48页 |
| 一、Gm ELF4基因的空间表达模式分析 | 第44-45页 |
| 二、Gm ELF4基因的时间表达模式分析 | 第45-46页 |
| 三、E1、E2、E3和E4对Gm ELF4的调控模式分析 | 第46-48页 |
| 第三节 Gm ELF4的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 第四节 Gm ELF4互补载体的构建 | 第49-50页 |
| 第五节 CRISPR/Cas9载体的构建 | 第50-53页 |
| 第四章 问题与讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62页 |