| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·植物抗旱研究 | 第12-13页 |
| ·旱害对植物的影响 | 第12页 |
| ·植物抗旱机理 | 第12-13页 |
| ·木薯概述 | 第13-14页 |
| ·木薯概况 | 第13页 |
| ·木薯抗旱研究进展 | 第13-14页 |
| ·植物抗逆相关的主要转录因子 | 第14-16页 |
| ·AP2/EREBP类转录因子 | 第14-15页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第15页 |
| ·MYB类转录因子 | 第15-16页 |
| ·WRKY类转录因子 | 第16页 |
| ·NAC类转录因子 | 第16页 |
| ·酵母单杂交技术的原理及研究进展 | 第16-18页 |
| ·高等植物启动子的结构和类型 | 第18-19页 |
| ·高等植物启动子的结构 | 第18-19页 |
| ·真核启动子的类型 | 第19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·本研究技术路线 | 第20-21页 |
| 2 实验材料与方法 | 第21-39页 |
| ·材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·干旱处理过程及采样 | 第21页 |
| ·质粒与菌种 | 第21页 |
| ·试剂及仪器 | 第21-22页 |
| ·方法与步骤 | 第22-39页 |
| ·MeAP2基因的筛选 | 第22页 |
| ·MeAP2基因的RT-PCR定量检测 | 第22-24页 |
| ·RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·cDNA的合成 | 第23页 |
| ·各基因间扩增效率的鉴定 | 第23-24页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第24页 |
| ·MeAP2基因启动子的克隆及序列分析 | 第24-27页 |
| ·木薯基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·引物的设计及合成 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第26页 |
| ·PCR产物克隆测序 | 第26-27页 |
| ·启动子序列分析及顺式作用元件的合成 | 第27页 |
| ·酵母单杂交诱饵载体(pAbAi-pMeAP2)的构建与鉴定 | 第27-30页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第27-29页 |
| ·诱饵菌株的合成与鉴定 | 第29-30页 |
| ·酵母转化系统Ⅱ | 第30-31页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·诱饵载体转化到酵母感受态细胞 | 第31页 |
| ·酵母单杂交诱饵菌株的AbA背景浓度筛选 | 第31-32页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第32-35页 |
| ·木薯离区部位RNA的提取 | 第32页 |
| ·木薯离区总RNA中polyA+mRNA的提取 | 第32-33页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| ·LD-PCR扩增双链cDNA | 第34-35页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第35页 |
| ·诱饵载体与cDNA文库质粒的大规模杂交筛选 | 第35-37页 |
| ·抑制诱饵菌株生长的AbA最小浓度筛选 | 第35页 |
| ·制备酵母感受态 | 第35页 |
| ·诱饵载体与cDNA文库共转化酵母 | 第35-37页 |
| ·阳性克隆的分离验证 | 第37-38页 |
| ·获取单克隆 | 第37页 |
| ·酵母菌落PCR验证 | 第37页 |
| ·文库质粒的分离及测析 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的荧光定量表达分析 | 第38-39页 |
| ·各个基因的组织特异性表达分析 | 第38页 |
| ·干旱胁迫下各基因的表达分析 | 第38-39页 |
| 3 实验结果分析 | 第39-66页 |
| ·木薯在干旱胁迫下的表型 | 第39-40页 |
| ·RNA提取质量 | 第40-41页 |
| ·MeAP2基因的选取 | 第41-44页 |
| ·荧光定量PCR中各基因间扩增效率的分析 | 第44-45页 |
| ·荧光定量结果分析 | 第45-47页 |
| ·MeAP2-2基因启动子的克隆 | 第47-48页 |
| ·生物信息学分析获取MeAP2-2基因5’端调控区 | 第47页 |
| ·MeAP2-2基因启动子的克隆条件摸索 | 第47-48页 |
| ·MeAP2-2基因启动子的序列分析 | 第48-51页 |
| ·调控AP2转录因子的筛选 | 第51-63页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第51-52页 |
| ·诱饵菌株的合成鉴定 | 第52-53页 |
| ·AbA背景浓度的筛选 | 第53-55页 |
| ·酵母单杂交cDNA文库的构建 | 第55-56页 |
| ·总RNA的提取质量 | 第55页 |
| ·cDNA双链的合成 | 第55-56页 |
| ·诱饵载体和cDNA文库质粒共转化酵母 | 第56-61页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第61-62页 |
| ·cDNA文库质粒分离 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆的分析 | 第63-64页 |
| ·阳性克隆的荧光定量表达分析 | 第64-66页 |
| ·各基因组织特异性表达 | 第64页 |
| ·干旱胁迫下各个基因的表达分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·MeAP2-2基因在干旱胁迫下的荧光定量表达分析 | 第66-67页 |
| ·MeAP2-2基因启动子的序列功能分析 | 第67-68页 |
| ·酵母单杂交假阳性分析 | 第68页 |
| ·调控MeAP2基因转录因子的筛选 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
