| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-26页 |
| 第一节 脑膜炎和脑膜炎奈瑟球菌 | 第12-15页 |
| 第二节 Lysostaphin与M23超家族 | 第15-19页 |
| 第三节 M23金属肽酶家族的结构生物学研究进展 | 第19-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-54页 |
| 第一节 实验材料 | 第26-35页 |
| ·目的基因 | 第26页 |
| ·常用载体 | 第26-27页 |
| ·本文所用大肠杆菌菌株 | 第27-29页 |
| ·试剂与耗材 | 第29-31页 |
| ·实验用仪器及工具 | 第31-33页 |
| ·实验试剂及溶液配制 | 第33-35页 |
| ·纯化用缓冲液配制 | 第35页 |
| 第二节 实验方法 | 第35-54页 |
| ·基因克隆及质粒构建 | 第35-40页 |
| ·目的蛋白的小量表达测试 | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的大量表达 | 第41页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第41-45页 |
| ·目的蛋白质的结晶 | 第45-48页 |
| ·晶体衍射数据的收集 | 第48-49页 |
| ·晶体结构的解析 | 第49-52页 |
| ·等温滴定量热法 | 第52页 |
| ·原子吸收光谱分析 | 第52页 |
| ·分子间交联实验 | 第52-54页 |
| 第三章 NMB0315的表达、纯化和晶体学研究 | 第54-109页 |
| 第一节 全长NMB0315的表达、纯化和结晶 | 第54-65页 |
| ·NMB0315的小量表达 | 第54页 |
| ·NMB0315的大量表达及纯化 | 第54-58页 |
| ·NMB0315的晶体初筛及初步优化 | 第58-62页 |
| ·利用其它方法优化全长NMB0315晶体 | 第62-65页 |
| 第二节 NMB0315(61-420)的表达、纯化与结晶 | 第65-69页 |
| ·NMB0315的二级结构预测和截短分析 | 第65-66页 |
| ·0315F1的质粒构建及小量表达测试 | 第66-67页 |
| ·0315F1的大量表达及纯化 | 第67-68页 |
| ·0315F1的晶体生长 | 第68-69页 |
| 第三节 NMB0315(54-420)的表达、纯化与结晶 | 第69-77页 |
| ·胰蛋白酶消化实验 | 第69-71页 |
| ·NMB0315两种片段的小量表达测试 | 第71页 |
| ·0315F3的大量表达及纯化 | 第71-73页 |
| ·0315F3结晶条件的初筛 | 第73-74页 |
| ·0315F3的甲基化及结晶初筛 | 第74-75页 |
| ·0315F3片段的晶体优化 | 第75-77页 |
| 第四节 NMB0315的结构解析 | 第77-87页 |
| ·NMB0315晶体衍射数据的处理 | 第77-79页 |
| ·初始相位的计算 | 第79-82页 |
| ·相位的获得和初始模型的搭建 | 第82-84页 |
| ·野生型数据的代入 | 第84-85页 |
| ·NMB0315结构的修正 | 第85-87页 |
| 第五节 NMB0315的结构及功能分析 | 第87-97页 |
| ·NMB0315的整体结构 | 第87-88页 |
| ·NMB0315的活性位点 | 第88-90页 |
| ·NMB0315活性位点中金属离子的研究 | 第90-93页 |
| ·NMB0315与其他M23家族蛋白的结构对比 | 第93-95页 |
| ·NMB0315的自抑制机制 | 第95-97页 |
| 第六节 NMB0315活性的初步探索 | 第97-107页 |
| ·NMB0315 DomaimⅢ的纯化尝试 | 第98-102页 |
| ·DomainⅡ+DomainⅢ的纯化及活性研究 | 第102-106页 |
| ·结果分析 | 第106-107页 |
| 第七节 讨论与总结 | 第107-109页 |
| 第四章 STIM1结构生物学的初步研究 | 第109-129页 |
| 第一节 引言 | 第109-118页 |
| ·钙离子信号转导 | 第109-110页 |
| ·钙库操纵的钙内流 | 第110-111页 |
| ·Orai1和STIM1分子 | 第111-118页 |
| 第二节 STIM1 C端部分片段的GST融合蛋白的研究 | 第118-124页 |
| ·hSTIM1(254-483)GST融合蛋白的表达与纯化 | 第118-119页 |
| ·hSTIM1(246-489)GST融合蛋白的表达、纯化与晶体初筛 | 第119-122页 |
| ·ceSTIM1(212-410)GST融合蛋白的表达、纯化与晶体初筛 | 第122-124页 |
| 第三节 利用N端交联模拟STIM1激活态的尝试 | 第124-129页 |
| 第五章 结论 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简历 | 第138页 |
