| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-35页 |
| ·默诺霉素及其研究进展 | 第16-26页 |
| ·默诺霉素概述 | 第16-18页 |
| ·默诺霉素的生物合成 | 第18-25页 |
| ·默诺霉素的抑菌机理 | 第25-26页 |
| ·全局调控基因对抗生素生物合成的影响 | 第26-34页 |
| ·孤立响应调控基因 | 第26-31页 |
| ·双组分调控基因 | 第31-34页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-57页 |
| ·实验材料 | 第35-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第35-37页 |
| ·PCR引物 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·缓冲液及试剂 | 第39-41页 |
| ·分子量标记 | 第41页 |
| ·各种氨基酸和试验用酶 | 第41页 |
| ·试剂盒 | 第41-42页 |
| ·抗生素 | 第42页 |
| ·仪器设备 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-57页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第43页 |
| ·链霉菌孢子悬液的制备 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第44页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·碱裂解法提取链霉菌质粒 | 第45-46页 |
| ·PCR及相关技术 | 第46-47页 |
| ·扩增已知序列旁邻的未知DNA序列的高效TAIL-PCR方法 | 第47-50页 |
| ·DNA片段纯化试剂盒 | 第50页 |
| ·DNA片段凝胶回收 | 第50-51页 |
| ·DNA连接 | 第51页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第51-52页 |
| ·DNA粘性末端的平滑化 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法制备感受态细胞及DNA转化 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移 | 第54页 |
| ·默诺霉素的液体发酵 | 第54-55页 |
| ·默诺霉素A标准品标准曲线的制作 | 第55页 |
| ·默诺霉素A效价的测定 | 第55页 |
| ·梯度平板法测定链霉菌的抗生素天然水平 | 第55页 |
| ·基因功能研究 | 第55-57页 |
| 第三章 结果与分析 | 第57-87页 |
| ·链霉菌对常用抗生素的天然抗性水平 | 第57-58页 |
| ·HPLC法测定默诺霉素A标准曲线 | 第58页 |
| ·relA基因的克隆及序列分析 | 第58-61页 |
| ·PCR扩增加纳链霉菌relA基因左臂和右臂 | 第59-60页 |
| ·PCR扩增斑堡链霉菌relA基因左臂和右臂 | 第60页 |
| ·加纳链霉菌relA基因序列的同源性比对 | 第60-61页 |
| ·斑堡链霉菌relA基因序列的同源性比对 | 第61页 |
| ·relA基因的阻断 | 第61-72页 |
| ·relA基因阻断质粒的构建 | 第61-66页 |
| ·pKQRK和pKBRK通过接合转移导入链霉菌 | 第66-67页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第67-69页 |
| ·relA阻断突变株的PCR验证 | 第69-70页 |
| ·relA基因阻断突变株的表型变化 | 第70-71页 |
| ·relA阻断对默诺霉素产量的影响 | 第71-72页 |
| ·relA阻断突变株的遗传稳定性研究 | 第72页 |
| ·nsdA基因的克隆及序列分析 | 第72-73页 |
| ·PCR克隆nsdA基因保守区域 | 第72-73页 |
| ·S.ghanaensis和S bambergiensis nsdA基因序列的同源性比对 | 第73页 |
| ·nsdA基因的阻断 | 第73-81页 |
| ·S.ghanaensis nsdA基因阻断质粒的构建 | 第73-76页 |
| ·S.bambergiensis nsdA基因阻断质粒的构建 | 第76-78页 |
| ·pKQNK和pKBNK通过接合转移导入链霉菌 | 第78页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第78-79页 |
| ·nsdA阻断突变株的PCR验证 | 第79页 |
| ·nsdA基因阻断突变株的表型变化 | 第79-80页 |
| ·nsdA阻断对默诺霉素产量的影响 | 第80页 |
| ·nsdA阻断突变株的遗传稳定性研究 | 第80-81页 |
| ·nsdA突变株的遗传互补 | 第81-87页 |
| ·hiTail-PCR扩增nsdA下游未知序列 | 第81-83页 |
| ·nsdA基因的扩增及核苷酸序列同源性比对 | 第83-84页 |
| ·遗传互补 | 第84-87页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第87-92页 |
| ·总结 | 第87-89页 |
| ·斑堡链霉菌和加纳链霉菌nsdA基因的克隆和分析 | 第87页 |
| ·斑堡链霉菌和加纳链霉菌relA基因阻断质粒的构建 | 第87-88页 |
| ·斑堡链霉菌和加纳链霉菌nsdA基因阻断质粒的构建 | 第88页 |
| ·斑堡链霉菌和加纳链霉菌relA基因的阻断 | 第88页 |
| ·斑堡链霉菌和加纳链霉菌nsdA基因的阻断与互补 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·关于relA、nsdA基因阻断载体的构建 | 第89-90页 |
| ·关于relA基因的阻断 | 第90页 |
| ·关于nsdA基因的阻断 | 第90页 |
| ·展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 附录 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读硕士学位期间主要科研成果 | 第108页 |
