| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| ·腈化合物与腈转化酶 | 第10-11页 |
| ·腈水解酶 | 第11-18页 |
| ·腈水解酶的来源 | 第11-12页 |
| ·腈水解酶的结构及催化机制 | 第12-15页 |
| ·腈水解酶的分离纯化 | 第15页 |
| ·腈水解酶酶活影响因素 | 第15-17页 |
| ·腈水解酶基因的克隆及表达 | 第17-18页 |
| ·腈水解酶在烟酸合成中的应用 | 第18-20页 |
| ·烟酸的用途 | 第18-19页 |
| ·烟酸的生物合成研究进展 | 第19-20页 |
| ·腈水解酶在异烟酸合成中的应用 | 第20-21页 |
| ·异烟酸的用途 | 第20页 |
| ·异烟酸的生物合成研究进展 | 第20-21页 |
| ·腈水解酶的其他应用 | 第21页 |
| ·在其他羧酸合成中的应用 | 第21页 |
| ·生物除污与生物降解 | 第21页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第21-23页 |
| 第二章 产腈水解酶菌株的筛选、鉴定及其发酵优化 | 第23-44页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·材料与方法 | 第23-27页 |
| ·菌株和培养基 | 第23页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·产腈水解酶菌株的筛选 | 第24页 |
| ·酶活测定 | 第24页 |
| ·菌株的形态学特征观察 | 第24页 |
| ·菌株的生理生化特性鉴定 | 第24-25页 |
| ·菌株的分子生物学鉴定 | 第25-27页 |
| ·产酶条件优化 | 第27页 |
| ·生物量测定 | 第27页 |
| ·分析方法 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-43页 |
| ·产腈水解酶菌株的筛选 | 第27-28页 |
| ·菌株的鉴定 | 第28-32页 |
| ·碳源对产酶的影响 | 第32-34页 |
| ·氮源对产酶的影响 | 第34页 |
| ·无机盐对产酶的影响 | 第34-36页 |
| ·诱导剂对产酶的影响 | 第36-37页 |
| ·培养基初始 pH 对产酶的影响 | 第37-38页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第38页 |
| ·装液量对产酶的影响 | 第38-39页 |
| ·菌体生长及产酶曲线 | 第39页 |
| ·响应面法优化 | 第39-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 P. putida 转化吡啶腈合成烟酸及异烟酸 | 第44-55页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·菌株和培养基 | 第44页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第44页 |
| ·酶活测定 | 第44-45页 |
| ·全细胞催化反应 | 第45页 |
| ·批次补料连续转化 3-、4-氰基吡啶 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-53页 |
| ·pH 对转化影响 | 第46页 |
| ·温度对转化的影响 | 第46-47页 |
| ·全细胞热稳定性 | 第47页 |
| ·金属离子对转化的影响 | 第47-48页 |
| ·表面活性剂对转化的影响 | 第48页 |
| ·底物谱 | 第48-49页 |
| ·转化 3-氰基吡啶合成烟酸 | 第49-51页 |
| ·转化 4-氰基吡啶合成异烟酸 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 P. putida 腈水解酶的分离纯化及酶学性质 | 第55-67页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-59页 |
| ·菌株和培养基 | 第55页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第55-56页 |
| ·腈水解酶的分离纯化 | 第56-57页 |
| ·相对分子质量测定 | 第57页 |
| ·等电点(pI)测定 | 第57页 |
| ·N-端测序 | 第57-58页 |
| ·酶活测定 | 第58页 |
| ·酶学性质研究 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-66页 |
| ·酶的分离纯化 | 第59-62页 |
| ·相对分子质量测定 | 第62页 |
| ·等电点(pI)分析 | 第62页 |
| ·酶的鉴定 | 第62-63页 |
| ·酶学性质研究 | 第63-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 P. putida 腈水解酶基因的克隆及表达 | 第67-89页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-75页 |
| ·菌株和质粒 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67-68页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第68页 |
| ·腈水解酶基因的克隆 | 第68-73页 |
| ·重组克隆质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第74页 |
| ·重组腈水解酶基因的表达 | 第74页 |
| ·腈水解酶重组菌转化 3-、4-氰基吡啶 | 第74页 |
| ·重组腈水解酶的分离纯化 | 第74-75页 |
| ·重组腈水解酶的酶活测定 | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-87页 |
| ·腈水解酶基因的克隆 | 第75-83页 |
| ·腈水解酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第83-85页 |
| ·重组菌对 3-、4-氰基吡啶的转化 | 第85-86页 |
| ·重组腈水解酶的分离纯化及酶活测定 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-91页 |
| 论文创新点 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 附录 | 第99页 |
