| 符号说明 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 大鼠IZUMO1原核表达载体的构建与重组蛋白的分离纯化 | 第12-26页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 一 材料和方法 | 第13-20页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·实验器材 | 第13页 |
| ·实验试剂 | 第13页 |
| ·实验载体 | 第13页 |
| ·菌种 | 第13-14页 |
| ·常用试剂的配方 | 第14页 |
| ·实验方法 | 第14-20页 |
| ·大鼠IZUMO1原核表达载体pET-IZUMO1的引物设计与合成 | 第14页 |
| ·大鼠pET-IZUMO1原核表达载体的构建 | 第14-16页 |
| ·大鼠重组质粒pET-IZUMO1在大肠杆菌中的诱导表达 | 第16页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白HIS-IZUMO1 | 第16-17页 |
| ·Western blot鉴定融合蛋白HIS-IZUMO1 | 第17-18页 |
| ·融合蛋白HIS-IZUMO1的切胶纯化 | 第18-19页 |
| ·Bradford法测蛋白浓度 | 第19-20页 |
| 二 结果 | 第20-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第20-21页 |
| ·过渡载体pMD-IZUMO1的构建 | 第20-21页 |
| ·原核表达载体pET-IZUMO1的构建 | 第21页 |
| ·大鼠重组质粒pET-IZUMO1在大肠杆菌中的诱导表达及纯化 | 第21-23页 |
| ·Western blot检测融合蛋白HIS-1ZUMO1 | 第23-24页 |
| ·融合蛋白HIS-IZUMO1的浓度测定 | 第24-25页 |
| 三 讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 小鼠抗大鼠IZUMO1腹水多克隆抗体制备及纯化 | 第26-33页 |
| 前言 | 第26-27页 |
| 一 材料和方法 | 第27-31页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·实验器材 | 第27页 |
| ·实验试剂 | 第27页 |
| ·实验细胞 | 第27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·培养腹水瘤细胞S180 | 第27-28页 |
| ·小鼠抗大鼠IZUMO1腹水多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·小鼠抗大鼠HIS-IZUMO1多克隆抗体的特异性检测 | 第29页 |
| ·小鼠大鼠IZUMO1多克隆抗体的效价测定 | 第29-31页 |
| 二 结果 | 第31-32页 |
| ·小鼠抗大鼠IZUMO1腹水多克隆抗体的鉴定 | 第31页 |
| ·小鼠抗大鼠IZUMOl腹水多克隆抗体的效价测定 | 第31-32页 |
| 三讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 IZUMO1在大鼠睾丸组织和精子中的定位 | 第33-41页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 一 材料和方法 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·实验器材 | 第34页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·实验试剂配方 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·大鼠IZUMO1在睾丸组织中的定位 | 第35页 |
| ·大鼠IZUMO1在顶体反应前后精子中的定位 | 第35-37页 |
| 二 结果 | 第37-40页 |
| ·大鼠IZUMO1在睾丸组织中的定位 | 第37-38页 |
| ·大鼠IZUMO1在精子中的定位 | 第38-40页 |
| ·大鼠IZUMO1在精子顶体反应前的定位 | 第38页 |
| ·大鼠IZUMO1在精子顶体反应后的定位 | 第38-40页 |
| 三 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 大鼠IZUMO1与PDIA3的相互作用 | 第41-68页 |
| 前言 | 第41-43页 |
| 一 材料和方法 | 第43-55页 |
| ·材料 | 第43-46页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验试剂 | 第43页 |
| ·实验试剂配方 | 第43-45页 |
| ·实验载体 | 第45-46页 |
| ·酵母菌株和实验细胞 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-55页 |
| ·构建pGBK-IZUMO1、pGBK-IZUMO1(A)、pGBK-IZUMO1(B)酵母表达载体引物的设计及合成 | 第46-47页 |
| ·酵母表达载体pGBK-IZUMO1、pGBK-IZUMO1(A)和pGBK-IZUMO1(B)的构建 | 第47页 |
| ·制备酵母Y187和Y2H Glod感受态 | 第47-48页 |
| ·酵母感受态的转化 | 第48-49页 |
| ·转化阳性酵母的PCR鉴定 | 第49页 |
| ·诱饵蛋白在Y2H中的自激活检测及毒性检测 | 第49页 |
| ·酵母Y187和Y2H Glod的杂交 | 第49-50页 |
| ·构建pcDNA-IZUMO1、pcDNA-IZUMO1(A)、pcDNA-IZUMO1(B)和pcDNA-PDIA3真核表达载体引物的设计及合成 | 第50-51页 |
| ·真核表达载体pcDNA-IZUMO1、pcDNA-IZUMO1(A)、pcDNA-IZUMO1(B)和pcDNA-PDIA3的构建 | 第51-52页 |
| ·293T细胞的培养 | 第52页 |
| ·细胞共转染 | 第52-53页 |
| ·提取细胞蛋白 | 第53页 |
| ·免疫共沉淀 | 第53-54页 |
| ·Western blot | 第54-55页 |
| 二结果 | 第55-66页 |
| ·酵母双杂交载体pGBK-IZUMO1、pGBK-IZUMO1(A)、pGBK-IZUMO1(B)的构建 | 第55-57页 |
| ·过渡载体pMD-IZUMO1、pMD-IZUMO1(A)和pMD-IZUMO1(B)的构建 | 第55-56页 |
| ·酵母双杂交载体pGBK-IZUMO1、pGBK-IZUMO1(A)、pGBK-IZUMO1(B)的构建 | 第56-57页 |
| ·酵母双杂交鉴定结果 | 第57-60页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第60-63页 |
| ·过渡载体pMD-IZUMO1、pMD-IZUMO1(A)、pMD-IZUMO1(B)与pMD-PDIA3的构建 | 第60-62页 |
| ·真核表达载体pcDNA-IZUMO1、pcDNA-IZUMO1(A)、pcDNA-IZUMO1(B)和pcDNA-PDIA3的构建 | 第62-63页 |
| ·Western blot及免疫共沉淀结果 | 第63-66页 |
| ·检测293T细胞 | 第63-64页 |
| ·Western blot检测pcDNA-IZUMO1和pcDNA-PDIA3单独转染细胞后所表达的蛋白 | 第64页 |
| ·Western blot检测pcDNA-IZUMO1和pcDNA-PDIA3共转染293T细胞后免疫共沉淀结果 | 第64-66页 |
| 三 讨论 | 第66-68页 |
| 参与精卵相互作用相关蛋白的研究进展 | 第68-76页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士期间参与的科研项目和发表的论文 | 第77页 |
