| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 上篇 文献综述 | 第9-26页 |
| 第一章 产酶溶杆菌的研究进展 | 第10-18页 |
| 1 产酶溶杆菌的分类地位 | 第10-11页 |
| 2 产酶溶杆菌的生物学特性 | 第11页 |
| 3 产酶溶杆菌对植物病害的生防机制 | 第11-18页 |
| ·胞外水解酶 | 第12-13页 |
| ·热稳定抗真菌因子HSAF | 第13-18页 |
| 第二章 孤立LuxR家族蛋白 | 第18-26页 |
| 1 群体感应系统(Quorum Sensing) | 第18页 |
| 2 依赖于AHLs的群体感应系统 | 第18-19页 |
| 3 LuxR蛋白家族 | 第19-26页 |
| ·孤立LuxR蛋白 | 第21-22页 |
| ·产生AHLs细菌的孤立LuxR | 第22-23页 |
| ·非产生AHLs细菌的孤立LuxR | 第23-26页 |
| 下篇 研究内容 | 第26-82页 |
| 第一章 产酶溶杆菌中一个孤立luxR基因的克隆与功能分析 | 第28-74页 |
| 摘要 | 第28页 |
| ABSTRACT | 第28-31页 |
| 1 实验材料 | 第31-35页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33-35页 |
| ·酶、抗生素、试剂盒和化学试剂 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-48页 |
| ·DNA操作方法和体系 | 第35-37页 |
| ·产酶溶杆菌lesR基因克隆和序列分析 | 第37页 |
| ·产酶溶杆菌lesR基因突变体构建 | 第37页 |
| ·产酶溶杆菌OH11基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第38-39页 |
| ·质粒的提取与酶切验证 | 第39-40页 |
| ·产酶溶杆菌OH11电转感受态的制备以突变体的筛选 | 第40-41页 |
| ·补和过表达菌株的构建 | 第41页 |
| ·结构域单独过表达菌株的构建 | 第41页 |
| ·病原菌拮抗活性测定 | 第41-42页 |
| ·HSAF的提取、HPLC和腐霉拮抗检测 | 第42-43页 |
| ·HSAF合成关键基因pks/nrps表达量的实时定量PCR | 第43-45页 |
| ·四种胞外酶检测 | 第45-46页 |
| ·菌体沉降和聚集观察 | 第46-47页 |
| ·色素产生情况的观察 | 第47页 |
| ·蛋白双向电泳 | 第47页 |
| ·质谱分析 | 第47-48页 |
| ·数据分析 | 第48页 |
| 3 结果分析 | 第48-69页 |
| ·LesR是一个孤立LuxR蛋白(solo LuxR) | 第48-50页 |
| ·lesR敲除突变体的构建 | 第50-52页 |
| ·lesR互补和过表达菌株的构建 | 第52-53页 |
| ·结构域单独过表达菌株的构建 | 第53-54页 |
| ·过表达菌株HSAF产量明显下降 | 第54-56页 |
| ·过表达菌株对病原真菌卵菌拮抗活性明显下降 | 第56页 |
| ·过表达菌株对酿酒酵母和革兰氏阳性细菌拮抗活性明显下降 | 第56-57页 |
| ·过表达菌株菌体沉降速度加快 | 第57-58页 |
| ·LesR通过调控Clp来调控HSAF的合成以及快速沉降 | 第58-59页 |
| ·过表达菌株产生了一种未知的黑色素 | 第59页 |
| ·LesR过表达菌株产生的黑色素和尿黑酸无关 | 第59-61页 |
| ·LesR蛋白依赖于DF信号分子来调控相关的生物学功能 | 第61页 |
| ·过表达菌株胞外酶的产量不发生变化 | 第61-62页 |
| ·HTH结构域在LesR的转录调控中起到了关键的作用 | 第62页 |
| ·产酶溶杆菌LesR蛋白是一个广谱性的调控因子 | 第62-69页 |
| 4 讨论 | 第69-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录一 产酶溶杆菌双精氨酸转运系统关键基因tatC的功能分析 | 第82-102页 |
| 摘要 | 第82页 |
| ABSTRACT | 第82-84页 |
| 1 材料与方法 | 第84-90页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第84页 |
| ·引物设计 | 第84-85页 |
| ·培养基 | 第85页 |
| ·产酶溶杆菌tatC基因克隆和序列分析 | 第85页 |
| ·tatC基因突变体构建和验证 | 第85-89页 |
| ·HSAF的提取、HPLC检测 | 第89页 |
| ·HSAF合成关键基因pks/nrps表达量的实时定量PCR | 第89页 |
| ·细胞形态、滑动性观察以及生长、生物膜测定 | 第89-90页 |
| ·四种胞外酶的检测 | 第90页 |
| ·对真菌和卵菌的抑菌实验 | 第90页 |
| ·Tat系统底物预测 | 第90页 |
| 2 结果和分析 | 第90-96页 |
| ·产酶溶杆菌tatC基因在黄单胞科中保守 | 第90-91页 |
| ·tatC敲除突变体的构建 | 第91-92页 |
| ·tatC基因突变后HSAF的产量显著升高 | 第92-93页 |
| ·tatC突变改变了细胞形态 | 第93页 |
| ·tatC突变影响了OH11的正常生长速率 | 第93-94页 |
| ·tatC突变降低了OH11生物膜的形成和滑动能力 | 第94-95页 |
| ·tatC突变不改变主要胞外酶的生物合成 | 第95页 |
| ·tatC突变不改变其抑菌能力 | 第95-96页 |
| ·Tat系统底物分析 | 第96页 |
| 3 讨论 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 本论文研究受资助项目 | 第106页 |
