| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 英文缩写词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-19页 |
| 第一章 酵母菌双杂交系统筛选PKR2相互作用的蛋白质 | 第19-51页 |
| ·实验材料与试剂 | 第19-24页 |
| ·主要实验仪器 | 第19-20页 |
| ·主要实验试剂与耗材 | 第20-21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21-24页 |
| ·实验用的质粒和菌种 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-38页 |
| ·构建pGBKT7-PKR2-C载体 | 第24-30页 |
| ·酵母双杂交系统阴性和阳性的对照实验 | 第30-32页 |
| ·检测PKR2-C蛋白的自活性和毒性 | 第32-34页 |
| ·酵母菌文库的筛选 | 第34-36页 |
| ·筛选出的cDNA文库质粒分离 | 第36页 |
| ·测序结果分析 | 第36-38页 |
| ·阳性结果验证 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-49页 |
| ·成功构建pGBKT7-PKR2-C质粒 | 第38-40页 |
| ·酵母双杂交系统阴性和阳性对照实验 | 第40-41页 |
| ·PKR2-C表达的自活性和毒性 | 第41-43页 |
| ·Y2HGold(pGBKT7-PKR2-C)酵母菌鉴定 | 第43-44页 |
| ·三叶草形状 | 第44页 |
| ·杂交酵母菌筛选 | 第44-45页 |
| ·筛选出的cDNA序列分析 | 第45-47页 |
| ·筛选到的文库质粒验证 | 第47-49页 |
| ·分析与讨论 | 第49-50页 |
| ·结论 | 第50-51页 |
| 第二章 PKR2与HSPD1的相互作用 | 第51-93页 |
| ·实验材料与试剂 | 第51-56页 |
| ·主要实验仪器 | 第51页 |
| ·主要实验试剂与耗材 | 第51-53页 |
| ·主要试剂的配制 | 第53-55页 |
| ·实验用细胞和质粒 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-77页 |
| ·HSPD1序列验证 | 第56页 |
| ·构建p3×Flag-HSPD1载体 | 第56-60页 |
| ·构建p3×Flag-HSPD1-N和p3×Flag-HSPD1-C载体 | 第60-65页 |
| ·构建pGEX-3X-PKR2C-(1-26aa)和pGEX-3X-PKR2C-(27-52aa)载体 | 第65-69页 |
| ·哺乳动物细胞培养 | 第69-70页 |
| ·诱导GST融合蛋白表达 | 第70页 |
| ·考马斯亮蓝验证GST融合蛋白的表达 | 第70-71页 |
| ·HSPD1在哺乳动物细胞表达 | 第71-72页 |
| ·GST Pull Down验证PKR2-C与HSPD1的相互作用 | 第72-74页 |
| ·GST Pull Down验证PKR1-C与HSPD1的相互作用 | 第74页 |
| ·GST Pull Down验证PKR2C-(1-26aa)和PKR2C-(27-52aa)与HSPD1的相互作用 | 第74-75页 |
| ·GST Pull Down验证PKR2C-(1-13aa)和PKR2C-(14-26aa)与HSPD1的相互作用 | 第75页 |
| ·免疫共沉淀验证PKR2与HSPD1的相互作用 | 第75-77页 |
| ·实验结果 | 第77-91页 |
| ·HSPD1测序结果 | 第77-78页 |
| ·成功构建p3×Flag-HSPD1质粒 | 第78-79页 |
| ·成功构建p3×Flag-HSPD1-N、p3×Flag-HSPD1-C和p3×Flag-HSPD1-26-573 aa质粒 | 第79-81页 |
| ·成功构建pGEX-3X-PKR2C-(1-26aa)和pGEX-3X-PKR2C-(27-52aa)质粒 | 第81-82页 |
| ·考马斯亮蓝验证GST融合蛋白的表达 | 第82-83页 |
| ·GST PullDown验证PKR2-C和PKR1-C与HSPD1的相互作用 | 第83-89页 |
| ·免疫共沉淀验证PKR2与HSPD1的相互作用 | 第89-91页 |
| ·分析与讨论 | 第91-92页 |
| ·结论 | 第92-93页 |
| 第三章 HSPD1对PKR2的影响 | 第93-107页 |
| ·实验材料与试剂 | 第93-95页 |
| ·主要实验仪器 | 第93页 |
| ·主要实验试剂与耗材 | 第93-94页 |
| ·主要试剂的配制 | 第94-95页 |
| ·实验用细胞和质粒 | 第95页 |
| ·实验方法 | 第95-101页 |
| ·PKR2的W178S和P290S位点突变 | 第95-97页 |
| ·HSPD1对PKR2活性的影响 | 第97-99页 |
| ·HSPD1-26-573aa对PKR2活性的影响 | 第99页 |
| ·HSPD1对PKR2-W178S和PKR2-P290S突变的影响 | 第99-100页 |
| ·HSPD1-26-573aa对PKR2-W178S和PKR2-P290S突变的影响 | 第100-101页 |
| ·实验结果 | 第101-106页 |
| ·两个突变测序 | 第101-102页 |
| ·HSPD1对PKR2功能的影响 | 第102-104页 |
| ·HSPD1对突变体功能的影响 | 第104-106页 |
| ·分析与讨论 | 第106页 |
| ·结论 | 第106-107页 |
| 全文总结 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-114页 |
| 综述 | 第114-128页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 个人简历 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
