| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| ·草鱼出血病 | 第11页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒 | 第11-13页 |
| ·形态特征 | 第12页 |
| ·理化特征 | 第12-13页 |
| ·GCRV发病机理 | 第13页 |
| ·GCRV分子生物学 | 第13-14页 |
| ·GCRV基因编码的蛋白质 | 第14页 |
| ·GCRV的检测方法 | 第14-16页 |
| ·免疫学检测方法 | 第15页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第15-16页 |
| ·草鱼出血病的防治 | 第16-17页 |
| ·传统疫苗 | 第16页 |
| ·重组亚单位疫苗 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第17-21页 |
| ·杆状病毒表达载体概述 | 第17-20页 |
| ·杆状病毒表达载体的应用 | 第20-21页 |
| ·研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 草鱼呼肠孤病毒诱导FHM细胞凋亡的初步研究 | 第22-30页 |
| ·引言 | 第22-23页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·细胞与毒株 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·细胞培养与病毒滴度的测定 | 第23页 |
| ·DAPI染色 | 第23-24页 |
| ·Annexin V-FITC染色 | 第24页 |
| ·TUNEL技术 | 第24页 |
| ·实验结果 | 第24-28页 |
| ·病毒感染CIK和FHM的细胞病变效应比较 | 第24页 |
| ·GCRV在CIK和FHM细胞中均能够有效增殖 | 第24-26页 |
| ·GCRV能够诱导FHM发生细胞凋亡 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 3 表达草鱼呼肠孤病毒VP6基因的重组杆状病毒构建及其诱导草鱼免疫反应的评价 | 第30-50页 |
| ·引言 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·质粒、细胞、菌株/毒株及动物 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要培养基 | 第32页 |
| ·主要缓冲液 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-42页 |
| ·重组杆状病毒构建的流程 | 第33-34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·PCR扩增VP6基因 | 第35页 |
| ·DNA片段的纯化回收 | 第35-36页 |
| ·重组转移质粒pFast-CMV-VP6的构建与鉴定 | 第36页 |
| ·转化 | 第36-37页 |
| ·质粒的小量制备 | 第37页 |
| ·重组质粒pFast-CMV-VP6的鉴定 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞DH10Bac的制备 | 第38页 |
| ·重组子rBacmid-CMV-VP6的构建鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组Bacmid DNA的提取及鉴定 | 第39页 |
| ·重组杆状病毒Bac-CMV-VP6的获得 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒的纯化及滴度的测定 | 第40页 |
| ·重组杆状病毒感染SF9细胞或转导EPC和CIK细胞 | 第40-41页 |
| ·间接免疫荧光实验检测VP6在昆虫细胞及鱼类细胞中的表达 | 第41页 |
| ·动物免疫实验 | 第41页 |
| ·免疫因子表达情况 | 第41页 |
| ·中和实验 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-47页 |
| ·目的基因VP6的扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒pFast-CMV-VP6的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid-CMV-VP6)的鉴定 | 第43-44页 |
| ·间接免疫荧光实验检测VP6蛋白在sf9、EPC和CIK细胞中的表达 | 第44-45页 |
| ·免疫相关基因IFN-I及IRF-7在肝脏与脾脏的表达情况 | 第45-46页 |
| ·中和实验 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63页 |
