| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-18页 |
| 目录 | 第18-21页 |
| 符号说明 | 第21-23页 |
| 前言 | 第23-27页 |
| 第一章 槚如酸对前列腺癌LNCAP细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用 | 第27-38页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·细胞培养 | 第28页 |
| ·细胞培养无菌操作技术 | 第28-29页 |
| ·细胞培养过程 | 第29-30页 |
| ·MTT检测槚如酸对前列腺癌LNCap细胞株生长和增殖的影响 | 第30-31页 |
| ·Annexin V凋亡实验 | 第31-32页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期中的sub-G1 | 第32-33页 |
| ·统计学方法 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-36页 |
| ·槚如酸抑制LNCap细胞的增殖的剂量和作用时间 | 第33-34页 |
| ·槚如酸对前列腺癌LNCap细胞增殖的影响 | 第34页 |
| ·槚如酸诱导前列腺癌LNCap细胞凋亡 | 第34-35页 |
| ·槚如酸导致前列腺癌LNCap细胞株的细胞周期阻滞于G1/S期 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第二章 槚如酸对前列腺癌LNCAP细胞株致死作用机制探讨 | 第38-58页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-49页 |
| ·siRNA的实验分组 | 第40页 |
| ·siRNA转染 | 第40页 |
| ·siRNA的准备 | 第40页 |
| ·siRNA瞬时转染 | 第40-41页 |
| ·MTT法检测细胞增殖 | 第41页 |
| ·流式细胞术检测细胞Annexin V凋亡实验 | 第41-42页 |
| ·real-time RT-PCR检测相应靶基因的mRNA含量 | 第42-45页 |
| ·蛋白质印迹(Western blot)检测目标基因蛋白含量 | 第45-48页 |
| ·统计学方法 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-55页 |
| ·不同浓度AA处理LNCap细胞24小时后p300、AR蛋白表达的变化情况 | 第49页 |
| ·不同浓度AA处理LNCap细胞24小时后p53、p21、p53-ser15蛋白表达的变化情况 | 第49-50页 |
| ·沉默p300基因,再使用125 umol/L的AA处理后观察其对LNCap细胞增殖、凋亡和AR基因的影响 | 第50-52页 |
| ·沉默wt-p53基因后再行从处理,观察从对LNCap细胞增殖、凋亡和重要靶基因p21的影响 | 第52-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第三章 槚如酸对不同前列腺癌细胞株内相关癌基因的影响 | 第58-67页 |
| ·实验材料和方法 | 第58-60页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第59页 |
| ·MTT实验,流式细胞术检测细胞Annexin V凋亡实验,real-time RT-PCR和Western Blot检测的具体实验流程同前 | 第59-60页 |
| ·统计学方法 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·AA对雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCap细胞内癌基因c-Myc、COX2和VEGFA的影响 | 第60-61页 |
| ·从对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞株的致死作用和对癌基因c-Myc、COX2和VEGFA的影响 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第四章 构建冷荧光报告质粒P53FL/IRES/RL筛选类似抗癌药物 | 第67-89页 |
| ·实验材料 | 第68-70页 |
| ·主要仪器 | 第68页 |
| ·主要材料、试剂与耗材 | 第68-69页 |
| ·细胞核浆分离缓冲液配方 | 第69页 |
| ·LB液体培养基 | 第69页 |
| ·质粒小量提取的预冷溶液制备 | 第69-70页 |
| ·实验方法 | 第70-74页 |
| ·p53FL/IRES/RL报告质粒构建技术路线 | 第70页 |
| ·报告质粒构建和制备的试验过程 | 第70-73页 |
| ·细胞转染 | 第73页 |
| ·免疫印迹 | 第73-74页 |
| ·细胞核浆分离 | 第74页 |
| ·统计学方法 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-86页 |
| ·p53FL/IRES/RL双冷荧光报告质粒的DNA测序和酶切鉴定结果 | 第74-82页 |
| ·报告质粒的细胞转染的结果 | 第82-83页 |
| ·p53FL/IRES/RL双冷荧光报告质粒的生物学功能验证 | 第83-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 综述 | 第97-116页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
