| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 1. 前言 | 第13-23页 |
| ·性别决定和性别分化 | 第13-16页 |
| ·鱼类的性别决定和性别分化概述 | 第13页 |
| ·鱼类性别决定和性别分化的相关基因 | 第13-16页 |
| ·鱼类生殖细胞的发育 | 第16-17页 |
| ·鱼类PGCs的迁移 | 第16-17页 |
| ·鱼类PGCs迁移相关的分子或基因 | 第17页 |
| ·鱼类PGCs与性别分化的关系 | 第17-19页 |
| ·鱼类PGCs的增殖对性别分化的影响 | 第18页 |
| ·鱼类PGCs的缺失对性别分化的影响 | 第18-19页 |
| ·dead(dnd)基因的研究进展 | 第19-20页 |
| ·dead end(dnd)基因在生殖细胞中的特异表达 | 第19-20页 |
| ·dead end(dnd)基因的作用机制 | 第20页 |
| ·稀有鮈鲫——理想的实验模式动物 | 第20-21页 |
| ·稀有鮈鲫的生物学特征 | 第20-21页 |
| ·稀有鮈鲫性别分化的相关研究进展 | 第21页 |
| ·本项目立项依据、研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 2. 材料和方法 | 第23-50页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·引物序列 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂盒及药品 | 第25-27页 |
| ·主要试剂盒 | 第25-26页 |
| ·主要药品 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-50页 |
| ·实验材料的获取 | 第27页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·DNaseⅠ消化总RNA | 第28-29页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·基因保守片段的克隆 | 第29-30页 |
| ·SMARTer~(TM) RACE-PCR克隆基因全长 | 第30-34页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第34页 |
| ·PCR回收产物的浓缩 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·目的DNA片段与载体的连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化和阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·序列分析 | 第36页 |
| ·RT-PCR时空表达分析 | 第36-37页 |
| ·RNA探针的标记 | 第37-38页 |
| ·原位杂交 | 第38-44页 |
| ·质粒的提取 | 第44-46页 |
| ·质粒的酶切及纯化 | 第46-47页 |
| ·pCS2~+-dnd重组质粒的制备 | 第47页 |
| ·dsRNA的体外转录 | 第47-49页 |
| ·mRNA的体外转录 | 第49-50页 |
| 3. 结果与分析 | 第50-70页 |
| ·稀有胸鲫dnd基因的克隆及序列分析 | 第50-61页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因保守片段的克隆 | 第50-55页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因全长的克隆 | 第55-58页 |
| ·Dnd同源性分析 | 第58-61页 |
| ·系统进化分析 | 第61页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因的表达模式分析 | 第61-65页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因的组织表达分析 | 第61-63页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因在胚胎发育时期的表达分析 | 第63-65页 |
| ·稀有鮈鲫整体原位杂交 | 第65-68页 |
| ·地高辛标记的RNA探针的构建 | 第65页 |
| ·稀有鮈鲫胚胎整体原位杂交 | 第65-68页 |
| ·体外合成dsRNA和mRNA | 第68-70页 |
| ·p~CS2~+-dnd重组质粒的制备 | 第68-69页 |
| ·dsRNA和mRNA的体外转录 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-73页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因的克隆及序列分析 | 第70-71页 |
| ·稀有鮈鲫dnd基因的表达模式分析 | 第71页 |
| ·稀有鮈鲫整体原位杂交分析 | 第71-72页 |
| ·结论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 攻读学位期间学术论文发表情况 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |